人早幼粒细胞白血病蛋白(PML)ELISA试剂盒
检测原理:
包被:将特异性的人PML捕获抗体预先包被在酶标板的微孔上,形成固相载体。
结合:向微孔中加入标准品或待测样本(如血清、血浆、细胞裂解液等),样本中的PML抗原会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的PML检测抗体,该抗体与已结合的PML抗原形成“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物。
酶联:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素。链霉亲和素与生物素标记的检测抗体高亲和力结合。
显色:加入TMB底物溶液,HRP催化TMB显色,溶液变为蓝色。颜色的深浅与样本中PML的浓度呈正相关。
终止与读数:加入终止液(通常为硫酸)终止反应,溶液由蓝色变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本中PML的浓度。
产品名称:
人早幼粒细胞白血病蛋白(PML)ELISA试剂盒
英文名称:Human Promyelocytic Leukemia Protein(PML)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031366
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌或型号的试剂盒性能参数存在差异,以下是常见参数的范围:
灵敏度:不同试剂盒的检测下限差异较大,范围可从 18.534 pg/mL 到 0.066 ng/mL 不等。
检测范围:常见的检测范围包括 109.375 - 7000 pg/mL 和 0.156 - 10 ng/mL 等。
特异性:试剂盒对PML具有高特异性,通常不与其它结构类似物发生交叉反应。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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