包被与捕获:将特异性的人APOM抗体预先包被在酶标板的微孔中,形成固相抗体。
加样与孵育:向微孔中加入标准品或待测样本(如血清、血浆等),样本中的APOM蛋白会与固相抗体结合,被捕获在微孔中。
加检测抗体:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的抗人APOM检测抗体。该抗体与APOM蛋白的另一个位点结合,形成“固相抗体-抗原-检测抗体”的夹心免疫复合物。
加酶结合物:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。由于生物素与链霉亲和素能特异性结合,HRP便被连接到免疫复合物上。
显色与检测:彻底洗涤后,加入TMB底物溶液。固相捕获的HRP会催化无色的TMB变成蓝色。最后加入终止液(通常是强酸),反应终止,颜色变为黄色。
结果计算:颜色的深浅与样本中APOM的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准品浓度和OD值绘制的标准曲线,即可计算出样本中APOM的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人载脂蛋白M(APOM)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031351 |
| 英文名称 |
Human Apolipoprotein M(APOM)ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同品牌和型号的试剂盒性能参数存在差异,以下是常见的参数范围:
灵敏度 (Sensitivity):指试剂盒能够检测到的最低APOM浓度。不同产品的灵敏度范围较广,通常在 0.1 ng/mL (100 pg/mL) 左右,部分高灵敏度试剂盒可达 0.055 ng/mL 或 0.121 ng/mL。
检测范围 (Detection Range):指试剂盒能够准确定量的浓度范围。常见的范围包括 0.312-20 ng/mL 和 1.56-100 ng/mL。
特异性 (Specificity):指试剂盒只与目
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度