人载脂蛋白L3(APOL3)ELISA试剂盒
检测原理:
包被与捕获:将特异性的人APOL3抗体预先包被在酶标板的微孔中,形成固相抗体。
加样与孵育:向微孔中加入标准品或待测样本(如血清、血浆、组织匀浆等),样本中的APOL3蛋白会与固相抗体结合,被捕获在微孔中。
加检测抗体:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的抗人APOL3检测抗体。该抗体与APOL3蛋白的另一个位点结合,形成“固相抗体-抗原-检测抗体”的夹心免疫复合物。
加酶结合物:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。由于生物素与链霉亲和素能特异性结合,HRP便被连接到免疫复合物上。
显色与检测:彻底洗涤后,加入TMB底物溶液。固相捕获的HRP会催化无色的TMB变成蓝色。最后加入终止液(通常是强酸),反应终止,颜色变为黄色。
结果计算:颜色的深浅与样本中APOL3的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准品浓度和OD值绘制的标准曲线,即可计算出样本中APOL3的浓度。
产品名称:
人载脂蛋白L3(APOL3)ELISA试剂盒
英文名称:Human Apolipoprotein L3(APOL3)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031347
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌和型号的试剂盒性能参数存在差异,以下是基于现有产品信息的常见参数示例:
灵敏度 (Sensitivity):指试剂盒能够检测到的最低APOL3浓度。例如,部分产品的灵敏度可达 0.055 ng/mL。
检测范围 (Detection Range):指试剂盒能够准确定量的浓度范围。一个典型的检测范围是 0.156-10 ng/mL。
特异性 (Specificity):指试剂盒只与目标蛋白(人APOL3)反应,而不与其他相似蛋白发生交叉反应的能力。优质的试剂盒会验证其能识别人源的天然和重组APOL3
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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