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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品属性
| 产品名称 | 人载脂蛋白F(APOF)ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E031344 |
| 英文名称 | Human Apolipoprotein F(APOF)ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
该试剂盒利用免疫学中的抗原-抗体特异性反应。微孔板（固相载体）上预先包被了针对人APOF的特异性抗体（捕获抗体）。整个反应过程大致如下：
加样与结合：将标准品或待测样本（血清、血浆等）加入微孔中，样本中的APOF抗原与板上固定的捕获抗体结合。
检测抗体结合：加入生物素标记的检测抗体，它会与APOF抗原的另一位点结合，形成“固相抗体-APOF抗原-生物素标记抗体”的复合物（即“夹心”结构）。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素（Avidin）。由于亲和素与生物素具有极高的亲和力，HRP会结合到复合物上。
显色反应：加入TMB底物溶液。HRP催化TMB显色，溶液由无色变为蓝色。
终止与读数：加入终止液（通常为硫酸），溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中APOF的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值）。
参数项目 典型指标范围 说明
检测范围 0.156 - 10 ng/mL 或 0.94 - 60 ng/mL 不同厂家设计的标准曲线范围不同，需根据样本预估浓度选择。
灵敏度 0.066 - 0.47 ng/mL 最小可检测剂量，反映试剂盒的检测下限。
特异性 高 不与其它细胞因子或类似蛋白发生交叉反应。
重复性 (精密度) 板内 CV < 10%
板间 CV < 12% CV（变异系数）越小，结果越稳定可靠。
ELISA试剂盒实验
加样与结合：将标准品或待测样本（血清、血浆等）加入微孔中，样本中的APOF抗原与板上固定的捕获抗体结合。
检测抗体结合：加入生物素标记的检测抗体，它会与APOF抗原的另一位点结合，形成“固相抗体-APOF抗原-生物素标记抗体”的复合物（即“夹心”结构）。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素（Avidin）。由于亲和素与生物素具有极高的亲和力，HRP会结合到复合物上。
显色反应：加入TMB底物溶液。HRP催化TMB显色，溶液由无色变为蓝色。
终止与读数：加入终止液（通常为硫酸），溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中APOF的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值）。
主要产品性能
检测范围 0.156 - 10 ng/mL 或 0.94 - 60 ng/mL 不同厂家设计的标准曲线范围不同，需根据样本预估浓度选择。
灵敏度 0.066 - 0.47 ng/mL 最小可检测剂量，反映试剂盒的检测下限。
特异性 高 不与其它细胞因子或类似蛋白发生交叉反应。
重复性 (精密度) 板内 CV < 10%
板间 CV < 12% CV（变异系数）越小，结果越稳定可靠。
常见规格与保存
产品规格：常见的有48T和96T两种规格，分别可进行48个或96个样本的检测。
样本类型：适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
保存条件：通常在2-8℃条件下避光保存。
有效期：一般为6个月。
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度：得益于酶催化底物的信号放大作用，ELISA能检测到低浓度甚至皮克级（pg/mL）的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性：特别是双抗体夹心法（最常用的方法），利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位，极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险，确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理：标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式，非常适合同时处理大量样本（如大规模筛查）。
自动化兼容：操作流程标准化，极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合，减少人为误差，显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型：可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本，通常不需要预先纯化抗原。
定量分析：通过标准曲线，可以精确计算样本中目标分子的浓度，提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性：与放射免疫分析法（RIA）不同，ELISA使用酶标记而非放射性同位素，避免了辐射危害，试剂处理更安全。
设备门槛低：除了酶标仪外，不需要昂贵的大型精密仪器（如流式细胞仪或质谱仪），普通实验室即可开展。
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第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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