人原钙黏素β10(PCDHβ10)ELISA试剂盒
检测原理:
PCDHβ10的检测利用两种特异性抗体将目标蛋白“夹”在中间进行定量。具体步骤如下:
包被与捕获:酶标板微孔表面预先包被了针对人PCDHβ10的特异性捕获抗体(通常为多克隆或单克隆抗体,识别胞外域)。
抗原结合:加入样本(血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等),样本中的PCDHβ10抗原与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:
加入生物素(Biotin)标记的抗人PCDHβ10检测抗体。
随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。生物素与链霉亲和素特异性结合,形成“捕获抗体-PCDHβ10-生物素化抗体-HRP-链霉亲和素”免疫复合物。
洗涤:洗去未结合的物质和游离酶。
显色反应:加入TMB底物溶液。HRP催化TMB氧化,溶液呈现蓝色。
终止与读数:加入酸性终止液(如硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。
产品名称:
人原钙黏素β10(PCDHβ10)ELISA试剂盒
英文名称:Human Protocadherin Beta 10(PCDHb10)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031300
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
特异性:
优质试剂盒对天然和重组人PCDHβ10具有高特异性。
通常不与其它原钙黏素家族成员(如PCDHα、PCDHγ)或其他钙黏蛋白发生交叉反应。
样本类型:广泛适用于血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆、细胞裂解液等。
注意:溶血标本可能会干扰检测,应避免使用。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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