人细胞凋亡因子配体(Fas-Ligand)试剂盒
检测原理:
FasL 的检测利用两种特异性抗体将目标蛋白“夹”在中间进行定量。具体步骤如下:
包被与捕获:酶标板微孔表面预先包被了针对人 FasL 的特异性捕获抗体(通常为单克隆抗体)。
抗原结合:加入样本(血清、血浆、细胞培养上清等),样本中的可溶性 FasL 抗原与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:
加入生物素(Biotin)标记的抗人 FasL 检测抗体(通常为多克隆抗体)。
随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。生物素与链霉亲和素特异性结合,形成“捕获抗体-FasL-生物素化抗体-HRP-链霉亲和素”免疫复合物。
洗涤:洗去未结合的物质和游离酶。
显色反应:加入 TMB 底物溶液。HRP 催化 TMB 氧化,溶液呈现蓝色。
终止与读数:加入酸性终止液(如硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值)。
产品名称:
人细胞凋亡因子配体(Fas-Ligand)试剂盒
英文名称:Human Fas-Ligand ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031292
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
特异性:
优质试剂盒对天然和重组人 FasL 具有高特异性。
与人源其他 TNF 家族成员(如 TNF-α, TRAIL)及其他细胞因子无明显交叉反应。
样本类型:广泛适用于血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆、细胞裂解液等。
注意:溶血标本可能会干扰检测,通常不建议使用。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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