人巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)试剂盒
检测原理:
包被与捕获:试剂盒的酶标板上预先包被了特异性的抗人GM-CSF单克隆抗体(捕获抗体)。
抗原结合:当加入样本(如血清、血浆等)时,样本中的GM-CSF会与板上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:洗涤去除未结合物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人GM-CSF检测抗体(部分试剂盒采用生物素标记检测抗体+亲和素-HRP的形式)。它会与已捕获的GM-CSF结合,形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的免疫复合物。
显色与检测:再次洗涤后,加入TMB显色底物。HRP会催化TMB显色,反应呈现蓝色,加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中GM-CSF的浓度成正比。
结果计算:用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中GM-CSF的浓度。
产品名称:
人巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)试剂盒
英文名称:Human Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,GM-CSF ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031273
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌和型号的试剂盒性能参数会有所差异,以下是综合多个主流产品信息整理的关键参数:
通常在 2 - 15.6 pg/mL 之间。部分高灵敏度试剂盒可达 2 pg/mL 级别。
检测范围 (Assay Range)
常见的检测范围包括:
常规范围:15.6 - 1000 pg/mL 或 31.2 - 2000 pg/mL。
特定范围:7.81 - 500 pg/mL。
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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