层粘连蛋白的检测基于抗原-抗体反应,利用两种特异性抗体将目标蛋白“夹”在中间进行定量。具体步骤如下:
包被与捕获:酶标板微孔表面预先包被了针对人Laminin的特异性捕获抗体。
抗原结合:加入样本(血清、血浆、组织匀浆等),样本中的Laminin抗原与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:
加入酶(通常是辣根过氧化物酶 HRP)标记的抗人Laminin检测抗体。
检测抗体与已被捕获的Laminin结合,形成“捕获抗体-Laminin-酶标检测抗体”的免疫复合物。
洗涤:洗去未结合的物质和游离酶。
显色反应:加入TMB底物溶液。HRP催化TMB氧化,溶液呈现蓝色。
终止与读数:加入酸性终止液(如硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。
产品属性
| 产品名称 |
人层粘连蛋白(Laminin)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031260 |
| 英文名称 |
Human Laminin ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
特异性:高质量的试剂盒对天然人Laminin具有高特异性。由于Laminin有多种亚型(如LN-511, LN-411等),大多数通用试剂盒检测的是总Laminin或特定主要亚型,通常不与胶原蛋白或其他结构类似物发生交叉反应。
样本类型:适用于血清、血浆(EDTA或肝素抗凝)、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物液体。
注意:样本处理时应避免溶血,溶血可能会干扰检测结果。
临床与科研意义:
肝纤维化:血清Laminin水平是反映肝窦毛细血管化和肝纤维化程度的重要指标。
肿瘤研究:Laminin与肿瘤的侵袭和转
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度