人白细胞介素5(IL-5)ELISA试剂盒
检测原理:
该试剂盒通常采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
包被与捕获:酶标板上预包被了特异性抗人IL-5的捕获抗体。
抗原抗体反应:加入样本(或标准品)和酶标记的检测抗体(或生物素标记的检测抗体,再与酶标亲和素结合)。样本中的IL-5抗原会同时与固相捕获抗体和检测抗体结合,形成“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未结合的其他成分。
显色:加入显色底物(如TMB),在酶的催化下产生颜色反应。
检测:颜色的深浅与样本中IL-5的浓度呈正相关。使用酶标仪在特定波长(如450nm)下测定吸光度(OD值),通过与标准曲线对比,即可计算出样本中IL-5的浓度。
产品名称:
人白细胞介素5(IL-5)ELISA试剂盒
英文名称:Human IL-5 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031251
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌试剂盒的具体参数可能略有差异,以下为典型性能参数:
灵敏度:通常小于 4 pg/ml。
特异性:可同时检测重组或天然的人IL-5,与系统中其他细胞因子无交叉反应。
重复性:板内和板间变异系数(CV)通常均小于12%。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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