双抗体夹心法的核心原理是利用两种特异性抗体来“夹住”并检测样本中的目标抗原(IL-27)。具体步骤如下:
包被与捕获:将抗人IL-27的特异性捕获抗体预先固定在酶标板的微孔上。
加入样本:向微孔中加入含有IL-27的样本(如血清、血浆、细胞培养上清等),样本中的IL-27会与包被抗体结合。
加入检测抗体:加入酶(通常是辣根过氧化物酶HRP)标记的抗人IL-27检测抗体,该抗体与已被捕获的IL-27结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的夹心复合物。
显色反应:加入TMB底物溶液。HRP会催化TMB显色,溶液变为蓝色。
终止与读数:加入酸性终止液(如硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)。样本中IL-27的浓度与OD值成正比,通过与标准品绘制的标准曲线对比,即可计算出样本中IL-27的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人白细胞介素27(IL-27)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031248 |
| 英文名称 |
Human IL-27 ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
特异性:高质量的试剂盒通常具有高特异性,与人源其他细胞因子无明显交叉反应。部分产品会明确说明可识别IL-27的特定亚基(如p28/EBI3复合体)。
适用样本:通常适用于血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等多种样本类型。
储存条件:一般在2-8℃条件下保存,有效期通常为6个月。
用途:所有产品均明确仅供科研使用,不用于临床诊断。
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度