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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
该试剂盒基于抗原-抗体的特异性反应，采用双抗体夹心法进行定量检测，具体步骤如下：
包被与捕获：酶标板的微孔表面预先包被了能特异性结合人HELIX-Ⅱ的捕获抗体。
抗原结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆、关节液等）和标准品。样本中的HELIX-Ⅱ抗原会与板上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体（部分试剂盒设计为生物素标记的抗体，随后加入HRP标记的链霉亲和素）。该抗体与已结合的HELIX-Ⅱ抗原的另一位点结合，形成“捕获抗体-抗原-酶标抗体”的三明治复合物。
洗涤与显色：彻底洗涤微孔，去除未结合的物质。随后加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），在HRP的催化下，TMB转化为蓝色产物。
终止与检测：加入终止液（酸性溶液）使反应停止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中HELIX-Ⅱ的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算出样本中HELIX-Ⅱ的浓度。
产品属性
主要产品性能
不同品牌试剂盒的性能参数存在差异，以下是基于现有资料整理的参数示例：
性能参数 典型指标示例 备注
检测类型 双抗体夹心法 高特异性
检测范围 0.156 - 10 ng/mL 或 2.5 - 80 ng/mL 等
灵敏度 < 0.1 ng/mL 不同品牌略有差异
精密度 板内、板间变异系数 (CV) < 10% 符合科研实验标准
特异性 不与Ⅰ型、Ⅲ型胶原交叉反应 保证检测准确性
包被与捕获：酶标板的微孔表面预先包被了能特异性结合人HELIX-Ⅱ的捕获抗体。
抗原结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆、关节液等）和标准品。样本中的HELIX-Ⅱ抗原会与板上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体（部分试剂盒设计为生物素标记的抗体，随后加入HRP标记的链霉亲和素）。该抗体与已结合的HELIX-Ⅱ抗原的另一位点结合，形成“捕获抗体-抗原-酶标抗体”的三明治复合物。
洗涤与显色：彻底洗涤微孔，去除未结合的物质。随后加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），在HRP的催化下，TMB转化为蓝色产物。
终止与检测：加入终止液（酸性溶液）使反应停止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中HELIX-Ⅱ的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算出样本中HELIX-Ⅱ的浓度。
产品属性
| 产品名称 | 人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E031218 |
| 英文名称 | Human type Ⅱ collagen helical peptide，HELIX-ⅡELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
性能参数 典型指标示例 备注
检测类型 双抗体夹心法 高特异性
检测范围 0.156 - 10 ng/mL 或 2.5 - 80 ng/mL 等
灵敏度 < 0.1 ng/mL 不同品牌略有差异
精密度 板内、板间变异系数 (CV) < 10% 符合科研实验标准
特异性 不与Ⅰ型、Ⅲ型胶原交叉反应 保证检测准确性
ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物，不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度
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