双抗体夹心法
这是目前应用较广泛的检测原理,其过程如下:
包被与捕获:微孔板预先包被有能特异性识别CTX-Ⅰ的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆等)后,样本中的CTX-Ⅰ抗原会与这些固相抗体结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的CTX-Ⅰ特异性检测抗体,该抗体与CTX-Ⅰ抗原的另一位点结合,形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色反应:再次洗涤后,加入底物溶液(如TMB),在HRP的催化下产生颜色反应(通常先变蓝,加终止液后变黄)。
定量分析:颜色的深浅与样本中CTX-Ⅰ的浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并与标准品曲线对比,即可计算出样本中CTX-Ⅰ的精确浓度。
主要产品性能
不同厂家生产的试剂盒性能参数存在差异,以下是两种常见规格的对比,可作为参考:
参数类别 规格一 (典型值) 规格二 (典型值)
检测范围 25 - 800 µg/L (或 pg/mL) 0.156 - 10 ng/mL
灵敏度 < 10 pg/mL < 0.063 ng/mL
样本类型 血清、血浆 血清、血浆、组织匀浆等
特异性 可特异性识别人CTX-Ⅰ,与其他类似物无明显交叉反应 可特异性识别人CTX-Ⅰ,与其他类似物无明显交叉反应
产品规格:常见的有48T和96T两种规格,分别可进行48个或96个样本的检测。
样本类型:适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
保存条件:通常在2-8℃条件下避光保存。
有效期:一般为6个月。
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度:得益于酶催化底物的信号放大作用,ELISA能检测到低浓度甚至皮克级(pg/mL)的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性:特别是双抗体夹心法(最常用的方法),利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位,极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险,确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理:标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式,非常适合同时处理大量样本(如大规模筛查)。
自动化兼容:操作流程标准化,极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合,减少人为误差,显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型:可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本,通常不需要预先纯化抗原。
定量分析:通过标准曲线,可以精确计算样本中目标分子的浓度,提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性:与放射免疫分析法(RIA)不同,ELISA使用酶标记而非放射性同位素,避免了辐射危害,试剂处理更安全。
设备门槛低:除了酶标仪外,不需要昂贵的大型精密仪器(如流式细胞仪或质谱仪),普通实验室即可开展。
公司正在出售的产品
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大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒 |
小鼠叉头框蛋白03(FoxP3)PCR试剂盒 |
| 人超敏热休克蛋白60(HSP-60)酶联免疫试剂盒 |
人Prominin 2(PROM2)ELISA试剂盒 |
大鼠P53(P53)PCR试剂盒 |
| 小鼠脑啡肽原B(PDYN)酶联免疫试剂盒 |
小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 |
人磷酸激酶1(PGK1)PCR试剂盒 |
| 人乳头状瘤病毒抗体酶联免疫试剂盒 |
人磷酸葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒 |
大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)PCR试剂盒 |
| 大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)酶联免疫试剂盒 |
大鼠妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒 |
人高敏甲状腺素(u-T4)PCR试剂盒 |
| 人抗肝可溶性抗原抗体(SLA)酶联免疫试剂盒 |
人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒 |
小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)PCR试剂盒 |
| 人白细胞介素27(IL-27)酶联免疫试剂盒 |
小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgG)ELISA试剂盒 |
人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒 |
| 人游离肉碱(Free Carnitine)酶联免疫试剂盒 |
人系统性红斑狼疮(SLE)ELISA试剂盒 |
人PodocinPCR试剂盒 |
| Mouse 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit |
Human anti-calsequestrin antibody IgG ELISA Kit |
Human 8-iso prostaglandin F2α,8-iso-PGF2a ELISA Kit |
| Human Free Carnitine ELISA kit |
小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 |
人硒结合蛋白1(SELENBP1)PCR试剂盒 |
ELISA试剂盒实验

第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。