人8-异构前列腺素F2α)ELISA试剂盒
检测原理:
该试剂盒的检测过程基于抗原-抗体的竞争性结合反应,具体步骤如下:
包被与竞争:微孔板预先包被有能特异性识别8-OHdG的捕获抗体。在反应体系中,加入待测样本(如血清、血浆、尿液、组织匀浆等)和酶标记的8-OHdG抗原(或生物素标记的8-OHdG)。样本中的8-OHdG与酶标记的8-OHdG会竞争结合板上有限数量的固相抗体结合位点。
温育与洗涤:经过一段时间的温育,使竞争反应达到平衡。然后洗去未结合的游离酶标记物。
显色反应:加入底物溶液(如TMB),在酶的催化下产生颜色反应(通常先变蓝,加终止液后变黄)。
定量分析:颜色的深浅与样本中8-OHdG的浓度成反比。即样本中8-OHdG浓度越高,能与固相抗体结合的酶标记物就越少,最终产生的颜色就越浅。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并与标准品曲线对比,即可计算出样本中8-OHdG的精确浓度。
产品名称:
人8-异构前列腺素F2α)ELISA试剂盒
英文名称:Human 8-epi-prostaglandin F2alpha,8-epi-PGF2α ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031201
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同厂家生产的试剂盒性能参数存在差异,以下是基于典型产品的参数,可作为参考:
参数类别 具体指标
检测范围 0.63 - 40 ng/mL
灵敏度 < 0.38 ng/mL
样本类型 血清、血浆、尿液、组织匀浆、细胞培养上清等
特异性 可特异性识别人8-OHdG,与其他类似物无明显交叉反应
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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