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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品属性
| 产品名称 | 人25羟基维生素D3(25 HVD3)ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E031174 |
| 英文名称 | Human 25-hydroxy vitamin D3,25 HVD3 ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
人25羟基维生素D3 ELISA试剂盒普遍采用双抗体一步夹心法（Sandwich ELISA）。其基本流程如下：
包被：将特异性的抗人25羟基维生素D3捕获抗体预先包被在酶标板的微孔中。
加样与结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆）和标准品。样本中的25羟基维生素D3抗原会与固相捕获抗体特异性结合。
酶标抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。该抗体与已结合的25羟基维生素D3形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤：彻底洗涤微孔，去除未结合的游离成分。
显色：加入显色底物（TMB）。在HRP的催化下，TMB转化为蓝色，颜色的深浅与样本中25羟基维生素D3的浓度呈正相关。
终止与检测：加入终止液（酸性溶液），反应终止，颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样本浓度。
性能参数 典型参数范围/说明
检测方法 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 需参考具体试剂盒说明书（不同品牌差异较大）
灵敏度 高灵敏度（具体数值视品牌而定）
精密度 (板内) 变异系数 (CV) < 10%
精密度 (板间) 变异系数 (CV) < 15%
特异性 与人25羟基维生素D3特异性结合，无明显交叉反应
ELISA试剂盒实验
包被：将特异性的抗人25羟基维生素D3捕获抗体预先包被在酶标板的微孔中。
加样与结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆）和标准品。样本中的25羟基维生素D3抗原会与固相捕获抗体特异性结合。
酶标抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。该抗体与已结合的25羟基维生素D3形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤：彻底洗涤微孔，去除未结合的游离成分。
显色：加入显色底物（TMB）。在HRP的催化下，TMB转化为蓝色，颜色的深浅与样本中25羟基维生素D3的浓度呈正相关。
终止与检测：加入终止液（酸性溶液），反应终止，颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样本浓度。
主要产品性能
检测方法 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 需参考具体试剂盒说明书（不同品牌差异较大）
灵敏度 高灵敏度（具体数值视品牌而定）
精密度 (板内) 变异系数 (CV) < 10%
精密度 (板间) 变异系数 (CV) < 15%
特异性 与人25羟基维生素D3特异性结合，无明显交叉反应
常见规格与保存
产品规格：常见的有48T和96T两种规格，分别可进行48个或96个样本的检测。
样本类型：适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
保存条件：通常在2-8℃条件下避光保存。
有效期：一般为6个月。
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度：得益于酶催化底物的信号放大作用，ELISA能检测到低浓度甚至皮克级（pg/mL）的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性：特别是双抗体夹心法（最常用的方法），利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位，极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险，确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理：标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式，非常适合同时处理大量样本（如大规模筛查）。
自动化兼容：操作流程标准化，极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合，减少人为误差，显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型：可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本，通常不需要预先纯化抗原。
定量分析：通过标准曲线，可以精确计算样本中目标分子的浓度，提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性：与放射免疫分析法（RIA）不同，ELISA使用酶标记而非放射性同位素，避免了辐射危害，试剂处理更安全。
设备门槛低：除了酶标仪外，不需要昂贵的大型精密仪器（如流式细胞仪或质谱仪），普通实验室即可开展。
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第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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