人20S蛋白酶体(20SP)ELISA试剂盒
检测原理:
双抗体夹心法
这是目前应用较广泛的检测原理,其过程如下:
包被与捕获:微孔板预先包被有能特异性识别20S蛋白酶体的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等)后,样本中的20SP抗原会与这些固相抗体结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的20SP特异性检测抗体,该抗体与20SP抗原的另一位点结合,形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色反应:再次洗涤后,加入底物溶液(如TMB),在HRP的催化下产生颜色反应(通常先变蓝,加终止液后变黄)。
定量分析:颜色的深浅与样本中20SP的浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并与标准品曲线对比,即可计算出样本中20SP的精确浓度。
产品名称:
人20S蛋白酶体(20SP)ELISA试剂盒
英文名称:Human 20S proteasome,20SP ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031172
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同厂家生产的试剂盒性能参数存在差异,以下是两种常见规格的对比,可作为参考:
参数类别 规格一 (典型值) 规格二 (典型值)
检测范围 0 - 1600 pg/mL 0.5 - 10 ng/mL
灵敏度 < 20 pg/mL 0.1 ng/mL
样本类型 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、体液等
特异性 可特异性识别人20SP,与其他类似物无明显交叉反应 可特异性识别人20SP,与其他类似物无明显交叉反应
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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