人14-3-3蛋白(14-3-3 pro)ELISA试剂盒

检测原理：
人14-3-3蛋白ELISA试剂盒普遍采用双抗体一步夹心法（Sandwich ELISA）。其基本流程如下：
包被：将特异性的抗人14-3-3蛋白捕获抗体预先包被在酶标板的微孔中。
加样与结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆、脑脊液）和标准品。样本中的14-3-3蛋白抗原会与固相捕获抗体特异性结合。
酶标抗体结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。该抗体与已结合的14-3-3蛋白上的另一个表位结合，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤：彻底洗涤微孔，去除未结合的游离成分。
显色：加入显色底物（TMB）。在HRP的催化下，TMB转化为蓝色，颜色的深浅与样本中14-3-3蛋白的浓度呈正相关。
终止与检测：加入终止液（酸性溶液），反应终止，颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样本浓度。
产品名称：人14-3-3蛋白(14-3-3 pro)ELISA试剂盒
英文名称：Human 14-3-3 Protein ELISA Kit
规格：48T/96T
货号：LZ-E031158
用途：仅供科研研究实验
核心概览：
性能参数  典型参数范围/说明
检测范围  1 - 32 ng/mL (常见范围，部分高敏试剂盒可达 pg/mL 级别)
灵敏度  通常 < 1.0 ng/mL (例如 0.1 ng/mL)
精密度 (板内)  变异系数 (CV) < 10%
精密度 (板间)  变异系数 (CV) < 15%
特异性  对天然人14-3-3蛋白具有高特异性，无明显交叉反应
样本类型  血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、脑脊液
样本处理要求：
1‌、血清‌：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清；可暂存于-20℃或-80℃，避免反复冻融
2‌、血浆‌：推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集，采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟，取上清检测
3‌、组织匀浆‌：用预冷PBS冲洗组织去除残留血液，按1:9（重量:体积）比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨，超声或反复冻融辅助裂解后，5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要：
‌一、试剂平衡‌：将试剂盒各组分于室温放置20分钟，恢复至常温。
‌二、加样‌：设空白孔、标准品孔（梯度浓度）、待测样本孔，每孔加入50μL样本或标准品。
‌三、孵育结合‌：每孔再加入HRP标记抗体100μL，37℃避光温育60分钟。
‌四、洗涤‌：弃液后用洗涤液洗板5次，拍干。
‌五、显色‌：每孔加TMB显色液A、B各50μL，37℃避光反应15分钟。
六、终止‌：每孔加50μL终止液，颜色由蓝转黄。
七、读数‌：15分钟内于450nm测定OD值，绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。

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