双抗体夹心法
这是目前应用较广泛的检测原理,其过程如下:
包被与捕获:微孔板预先包被有能特异性识别1,25 DHVD3的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆等)后,样本中的1,25 DHVD3抗原会与这些固相抗体结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入酶(通常是辣根过氧化物酶HRP)标记的1,25 DHVD3特异性检测抗体,形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色反应:再次洗涤后,加入底物溶液(如TMB),在HRP的催化下产生颜色反应(通常先变蓝,加终止液后变黄)。
定量分析:颜色的深浅与样本中1,25 DHVD3的浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并与标准品曲线对比,即可计算出样本中1,25 DHVD3的精确浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)试剂盒 |
货号 |
LZ-E031148 |
| 英文名称 |
Human 1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-dihydroxyvitamin D3 ELISA kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同厂家生产的试剂盒性能参数存在差异,以下是两种常见规格的对比,可作为参考:
参数类别 规格一 (典型值) 规格二 (典型值)
检测范围 31.25 - 2000 pg/mL 24.69 - 2000 pg/mL
灵敏度 < 10.4 pg/mL < 9.92 pg/mL
样本类型 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等
特异性 可特异性识别人1,25 DHVD3,与其他类似物无明显交叉反应 可特异性识别人1,25 DHVD3,与其他类似物无明显交叉
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
公司正在出售的产品
| 大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)酶联免疫试剂盒 |
大鼠CD34分子(CD34)ELISA试剂盒 |
小鼠白介素22(IL-22)PCR试剂盒 |
| 人大肠癌专一抗原3(CCSA-3)酶联免疫试剂盒 |
人HIV(1+2)抗原抗体ELISA试剂盒 |
大鼠CD19分子(CD19)PCR试剂盒 |
| 小鼠去甲肾上腺素(NA)酶联免疫试剂盒 |
小鼠白介素25(IL25/C19orf10)ELISA试剂盒 |
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)PCR试剂盒 |
| 人神经型一氧化氮合成酶(nNOS)酶联免疫试剂盒 |
人类白细胞抗原B27(HLA-B27)ELISA试剂盒 |
大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)PCR试剂盒 |
| 小鼠1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)酶联免疫试剂盒 |
大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒 |
人钙结合蛋白S100A14PCR试剂盒 |
| 人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)酶联免疫试剂盒 |
人钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒 |
小鼠血小板生成素(TPO)PCR试剂盒 |
| 人5羟色胺(5-HT)酶联免疫试剂盒 |
小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒 |
人1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)试剂盒 |
| 人脂联素受体1(ADIPOR1)酶联免疫试剂盒 |
人微管多特异性有机阴离子转运蛋白2(ABCC3)ELISA试剂盒 |
人G蛋白偶联受体109A(GPR109A)PCR试剂盒 |
| Mouse CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA Kit |
Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody,ASCA ELISA Kit |
Human Liprin alpha 1 ELISA Kit |
| Human Adiponectin Receptor Protein 1,ADIPOR1 ELISA Kit |
小鼠白介素25(IL25/C19orf10)ELISA试剂盒 |
人网膜素(omentin)PCR试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。