人ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA试剂盒
检测原理:
该试剂盒的检测过程基于抗原-抗体的特异性反应,具体步骤如下:
包被与捕获:微孔板预先包被有能特异性识别人ARF4的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等)后,样本中的ARF4抗原会与这些固相抗体结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的ARF4特异性检测抗体,该抗体与ARF4抗原的另一位点结合,形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色反应:再次洗涤后,加入底物溶液(如TMB),在HRP的催化下产生颜色反应(通常先变蓝,加终止液后变黄)。
定量分析:颜色的深浅与样本中ARF4的浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并与标准品曲线对比,即可计算出样本中ARF4的精确浓度。
产品名称:
人ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA试剂盒
英文名称:Human ARF4 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031140
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同厂家生产的试剂盒性能参数存在差异,以下是两种常见规格的对比,可作为参考:
参数类别 规格一 (典型值) 规格二 (典型值)
检测范围 15.6 - 1000 pg/mL 0 - 32 pg/mL
灵敏度 < 10 pg/mL < 1 pg/mL
样本类型 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等
特异性 可特异性识别人ARF4,与其他类似物无明显交叉反应 可特异性识别人ARF4,与其他类似物无明显交叉反应
重复性 板内、板间变异系数(CV)通常
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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