双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
这是较为常见的检测蛋白或多肽的方法,适用于抗原分子具有至少两个抗体结合位点的情况。
包被:将特异性的抗人AP13捕获抗体预先包被在酶标板的微孔中。
加样与结合:加入待测样本和标准品,样本中的AP13抗原与固相捕获抗体结合。
酶标抗体结合:加入酶(通常是辣根过氧化物酶HRP)标记的检测抗体,它与AP13抗原的另一个位点结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。
洗涤:洗去未结合的游离成分。
显色:加入显色底物(如TMB),在酶的催化下显色(通常为蓝色),颜色深浅与样本中AP13的浓度成正比。
终止与检测:加入终止液(颜色变为黄色),使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算浓度。
主要产品性能
性能参数 典型参数范围
检测范围 夹心法:2.5 - 80 ng/mL
竞争法:12.35 - 1000 pg/mL 或 0.78 - 50 ng/mL
灵敏度 夹心法:通常 < 0.1 ng/mL
竞争法:通常 < 5 pg/mL 或 < 0.5 ng/mL
精密度 板内变异系数(CV) < 10%
板间变异系数(CV) < 15%
特异性 不与其它结构类似物发生交叉反应
样本类型 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、脑脊液等
产品规格:常见的有48T和96T两种规格,分别可进行48个或96个样本的检测。
样本类型:适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
保存条件:通常在2-8℃条件下避光保存。
有效期:一般为6个月。
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度:得益于酶催化底物的信号放大作用,ELISA能检测到低浓度甚至皮克级(pg/mL)的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性:特别是双抗体夹心法(最常用的方法),利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位,极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险,确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理:标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式,非常适合同时处理大量样本(如大规模筛查)。
自动化兼容:操作流程标准化,极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合,减少人为误差,显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型:可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本,通常不需要预先纯化抗原。
定量分析:通过标准曲线,可以精确计算样本中目标分子的浓度,提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性:与放射免疫分析法(RIA)不同,ELISA使用酶标记而非放射性同位素,避免了辐射危害,试剂处理更安全。
设备门槛低:除了酶标仪外,不需要昂贵的大型精密仪器(如流式细胞仪或质谱仪),普通实验室即可开展。
公司正在出售的产品
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小鼠白介素12(IL-12/P40)PCR试剂盒 |
| 人胆固醇(CH)酶联免疫试剂盒 |
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| 小鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)酶联免疫试剂盒 |
小鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 |
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| 人20S蛋白酶体(20SP)酶联免疫试剂盒 |
小鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒 |
人apelin 13(AP13)ELISA试剂盒 |
| 人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)酶联免疫试剂盒 |
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| Mouse Protein FAM84A,FAM84A ELISA kit |
Human anti-papillomavirus type 17(HPV17) Kit |
Human apelin 13,AP13 ELISA Kit |
| Human neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA Kit |
小鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 |
人褪黑素(MT)PCR试剂盒 |
ELISA试剂盒实验

第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。