人CCAAT增强子结合蛋白δELISA试剂盒
检测原理:
该试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)作为检测原理。其基本步骤如下:
包被与捕获:试剂盒的微孔板表面已预包被了针对人C/EBPδ的特异性捕获抗体。当加入样本或标准品后,样本中的C/EBPδ抗原会与板上的捕获抗体结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。该抗体能与C/EBPδ抗原的另一位点结合,从而形成“捕获抗体-C/EBPδ抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色反应:再次洗涤后,加入TMB底物溶液。HRP会催化TMB显色,溶液变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(通常为酸性溶液)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下检测吸光度(OD值)。样本中C/EBPδ的浓度与OD值成正比,通过与标准品绘制的标准曲线进行对比,即可计算出样本中C/EBPδ的精确浓度。
产品名称:
人CCAAT增强子结合蛋白δELISA试剂盒
英文名称:Human CCAAT/enhancer binding protein deta,C/EBPδ ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031096
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同厂家生产的试剂盒在具体参数上存在差异,以下是基于现有资料整理的性能参数:
参数 典型范围/数值
检测范围 需参考具体产品说明书
灵敏度 需参考具体产品说明书
精密度 批内变异系数(CV) < 10%
批间变异系数(CV) < 15%
样本类型 血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、体液等
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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