人CD134分子(CD134)ELISA试剂盒
检测原理:
人CD134 ELISA试剂盒普遍采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上预先包被了能特异性捕获CD134蛋白的抗体(捕获抗体)。
反应:向微孔中依次加入待测样本(或标准品)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体(或生物素化抗体+酶标亲和素)。样本中的CD134抗原会同时与固相捕获抗体和酶标检测抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤:经过温育后,彻底洗涤微孔,去除未结合的其他物质。
显色:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。TMB在HRP的催化下由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(酸性溶液)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中CD134的浓度呈正相关。
计算:使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线来计算样本中CD134的浓度。
产品名称:
人CD134分子(CD134)ELISA试剂盒
英文名称:Human CD134 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031086
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同厂家生产的试剂盒在具体性能参数上会有所差异,以下是基于典型产品的参数示例:
参数 典型参数示例 说明
检测范围 31.2 - 2000 pg/mL 覆盖生理及病理浓度,部分试剂盒范围可能略有不同。
灵敏度 < 10 pg/mL 高质量试剂盒可达此灵敏度级别,能检测低浓度样本。
特异性 对CD134具有高特异性 识别CD134特有抗原表位,不与TNFRSF家族其他成员(如CD137)交叉。
重复性 (CV) 板内<10%, 板间<15% 衡量试剂盒稳定性的关键指标,CV值越小代表结果
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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