人CD5L ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上预先包被了能特异性捕获CD5L蛋白的抗体(捕获抗体)。部分高质量试剂盒使用的抗体能够识别与IgM结合的CD5L,从而检测血液中的总CD5L水平。
反应:向微孔中依次加入待测样本(或标准品)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体(或生物素化抗体+酶标亲和素)。样本中的CD5L抗原会同时与固相捕获抗体和酶标检测抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤:经过温育后,彻底洗涤微孔,去除未结合的其他物质。
显色:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。TMB在HRP的催化下由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(酸性溶液)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中CD5L的浓度呈正相关。
计算:使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线来计算样本中CD5L的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人CD5分子样蛋白(CD5L)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031070 |
| 英文名称 |
Human CD5L ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同厂家生产的试剂盒在具体性能参数上会有所差异,以下是基于典型产品的参数示例:
参数 典型参数示例 说明
检测范围 0.78 - 50 ng/mL 覆盖生理及病理浓度,部分试剂盒范围可能为0.156-10 ng/mL。
灵敏度 < 0.05 ng/mL 高质量试剂盒可达此灵敏度级别,能检测低浓度样本。
特异性 对CD5L具有高特异性 识别CD5L特有抗原表位,不与IgM或其他SRCR家族蛋白交叉。
重复性 (CV) 板内<10%, 板间<12% 衡量试剂盒稳定性的关键指标,CV值越小代
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度