人CD82分子(CD82)ELISA试剂盒
检测原理:
人CD82 ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。这是目前检测膜蛋白或其可溶性片段最常用且特异性较高的方法。
具体步骤如下:
包被与捕获:酶标板(固相载体)上预先包被了针对人CD82的特异性捕获抗体(通常为鼠抗人CD82单克隆抗体)。
抗原结合:加入样本(血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆或细胞培养上清等)或标准品,样本中的CD82抗原会与固相上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体(或生物素标记抗体+酶标亲和素)。该抗体识别CD82分子上的另一个抗原表位,从而形成“固相抗体-CD82-酶标抗体”的夹心复合物。
显色反应:加入底物溶液(通常为TMB)。TMB在HRP的催化下由无色变为蓝色。
终止与读数:加入终止液(如硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中CD82的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本浓度。
产品名称:
人CD82分子(CD82)ELISA试剂盒
英文名称:Human CD82 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031065
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
参数项目 典型数值/描述 说明
检测范围 78.1 – 5000 pg/mL
(或 0.1 – 20 ng/mL) 覆盖生理及病理状态下的常见浓度范围。
灵敏度 78 pg/mL
(典型值约 0.05 ng/mL) 高灵敏度,能够检测到低水平的转移抑制蛋白。
特异性 高特异性 专一识别人CD82/KAI-1,与其他四跨膜蛋白家族成员(如CD9, CD63, CD81)无明显交叉反应。
精密度 (CV) 批内 10%
批间 12% 变异系数越低,说明实验重复性越好。
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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