人c-fos ELISA试剂盒普遍采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上预先包被了能特异性捕获c-fos蛋白的单克隆抗体(捕获抗体)。
反应:向微孔中依次加入待测样本(或标准品)和生物素化的抗人c-fos抗体。样本中的c-fos抗原会同时与固相捕获抗体和生物素化抗体结合,形成“抗体-抗原-生物素化抗体”复合物。
酶标结合:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin),它与生物素化抗体上的生物素特异性结合。
洗涤:经过温育后,彻底洗涤微孔,去除未结合的其他物质。
显色:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。TMB在HRP的催化下由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(酸性溶液)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中c-fos的浓度呈正相关。
计算:使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线来计算样本中c-fos的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人c-fosELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031062 |
| 英文名称 |
Human c-fos ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同厂家生产的试剂盒在具体性能参数上会有所差异,以下是基于典型产品的参数示例:
参数 典型参数示例 说明
检测范围 0.156 - 10 ng/mL (或 20-6000 ng/L) 覆盖生理及病理浓度,部分试剂盒范围可能略有不同。
灵敏度 < 0.1 ng/mL (或 < 10 ng/L) 高质量试剂盒可达此灵敏度级别,能检测低浓度样本。
特异性 对c-fos具有高特异性 识别c-fos特有抗原表位,不与c-jun、p53等其他蛋白交叉。
重复性 (CV) 板内<8%, 板间<10%
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
公司正在出售的产品
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小鼠维生素A(VA)ELISA试剂盒 |
人c-fosELISA试剂盒 |
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小鼠Qa淋巴细胞抗原2(Qa-2)ELISA试剂盒 |
人胎儿血红蛋白(HBF)PCR试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。