
大鼠牙龈成纤维分离自牙龈组织;牙龈指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构,由复层扁平上皮及固有层组成。是口腔黏膜的一部分,血管丰富,呈淡红色,坚韧而有弹性,因缺乏黏膜下层,直接与骨膜紧密相连,故牙龈不能移动。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介 公司实验室分离的大鼠牙龈成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠牙龈成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
生物学特性:
原代细胞的核心价值在于其高度的生理相关性,这主要体现在以下几个方面:
高度模拟体内状态
原代细胞直接从机体取出,离体时间短,因此最大程度地保留了其来源组织的遗传特征、基因表达谱、代谢功能和细胞间相互作用。这使得它们能够真实地反映细胞在体内的生长状态和对各种刺激的反应。
有限的增殖能力
与可以无限增殖的细胞系不同,原代细胞是正常的、未经转化的细胞,其分裂能力有限。它们通常只能传代10次以内(通常将第1至第10代的细胞统称为原代细胞),随后便会进入衰老期并死亡,这一现象与“海弗利克极限”有关。
遗传稳定性
原代细胞通常保持正常的二倍体染色体数目,遗传物质未发生改变。这确保了实验结果的准确性,避免了因长期体外培养导致的基因突变或染色体异常。
细胞异质性
从组织中分离的原代细胞群体可能包含多种细胞类型,例如在培养上皮细胞时,常常会伴随有成纤维细胞的生长。这种异质性在一定程度上反映了体内组织的真实构成,但也对细胞的纯化提出了要求。
基本参数:
在实际操作和应用中,原代细胞表现出以下基本参数特征:
参数维度 特征描述
来源与制备 直接来源于人或动物的新鲜组织、器官、外周血或胚胎。通常使用胰蛋白酶、胶原酶等进行酶消化,或采用机械法分散获得单个细胞悬液。
培养条件 培养要求较为苛刻,需要特定的培养基、生长因子和适宜的贴壁表面(如经细胞外基质蛋白包被),且对无菌操作要求极高。
生长特性 生长相对缓慢,增殖能力弱。不同来源的细胞增殖能力不同,例如骨骼肌细胞可传代10-12代,而上皮细胞通常在3-4代后成纤维细胞会成为优势细胞。
成本与周期 分离和培养过程耗时、费力,且成本较高。由于增殖能力有限,不适合大规模、长期的实验。
公司正在出售的产品:
| 组织结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量检测试剂盒 |
肌神经蛋白抗体 |
| 糖类棉子糖比色法定量检测试剂盒 |
蛋白样品液相法去内毒素试剂盒 |
| 组织EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定量PCR扩增检测试剂盒 |
HOECHST33342/PI简易细胞核形态染色试剂盒 |
| TEM电镜石蜡切片免疫组织化学AP酶联NBT/BCIP基础检测试剂盒 |
PerCP-Cy5.5标记人CD103 (ITGAE)单克隆抗体 |
| 冰冻切片组织CASPASE-5蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
甘丙肽/神经节肽抗体 |
| 细胞PKCι激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
肿瘤转移相关蛋白1抗体 |
| TNF ALPHA蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
碳水化合物磺基转移酶14抗体 |
| 细胞外信号调节激酶5重组兔单克隆抗体 |
eIF2Bγ蛋白抗体 |
| 大量蛋白样品树脂法去内毒素试剂盒 |
磷脂酶C样蛋白2抗体 |
| 组织HCV(HEPATITIS VIRUS C)病毒定量PCR扩增检测试剂盒 |
胆碱磷酸酯酶2抗体 |
| 细胞PKCι激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
大鼠牙龈成纤维细胞6号染色体开放阅读框35抗体 |
| 氧固醇结合蛋白1抗体 |
酪氨酸酶相关蛋白2抗体 |
| 人前列腺癌组织源细胞 |
大鼠输尿管平滑肌细胞 |
| Rabbit Hepatic Parenchymal Cells |
Rabbit primary gastric mucosal fibroblasts |
关键注意事项:
无菌操作 这是细胞培养的生命线。操作前需对超净台进行紫外灭菌,操作过程要规范、迅速,避免污染。
消化控制 酶消化是关键步骤。消化时间过长会损伤细胞,过短则解离不充分。需根据组织类型和酶活性灵活调整。
细胞状态 原代细胞非常脆弱,尤其是首次传代时,应保证较高的接种密度,否则细胞难以生长。
冻存策略 原代细胞不建议在P0代直接冻存。通常建议在细胞状态较好的P2或P3代进行冻存,以保证复苏后的活性。