原代细胞(Primary Cells)是指直接从生物体组织或器官中分离并立即进行体外培养的初始细胞。
与经过长期传代、遗传特性可能改变的细胞系不同,原代细胞因其离体时间短,
最大限度地保留了来源组织的原始遗传背景、生物学特性和生理功能,能够更真实地反映细胞在体内的状态。
尽管其增殖能力有限,培养难度相对较高,但凭借其高度的体内相关性,原代细胞在药物筛选、
毒理研究、疾病模型构建、基因功能分析及再生医学等前沿领域,已成为不可或缺的关键研究工具
细胞简介:

大鼠食管成纤维分离自食管组织;食管是咽和胃之间的消化管,食管在系统发生上起初很短,随着颈部的伸长和心肺的下降,而逐渐增长。食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端,胸段位于左、右肺之间的纵膈内,胸段通过膈孔与腹腔内腹相连,腹段很短与胃相连。在发育过程中,食管的上皮细胞增殖,由单层变为复层,食管使管腔变狭窄,甚至一度闭锁,以后管腔又重新出现。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层:黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中,黏膜层,包括上皮、固有层和黏膜肌层。食管的外膜,由疏松结缔组织构成,富有血管、淋巴管及神经。主要包含食管成纤维细胞,成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介 实验室分离的大鼠食管成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测 实验室分离的大鼠食管成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基:基础培养基,含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传2-3代左右
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠食管成纤维体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞分离步骤:
从液体样本中分离细胞
对于血液、骨髓、腹水等本身就是细胞悬液的样本,分离过程主要基于细胞的物理特性(如密度、大小)或生物学特性(如表面标志物)进行纯化。
1. 密度梯度离心法
这是从外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs,主要包括淋巴细胞和单核细胞)最常用的方法。
原理:利用不同细胞的密度差异。通过离心,使细胞在特定密度的分离液(如Ficoll-Hypaque,密度为1.077 g/ml)中分层。
简要步骤:
将抗凝血用PBS等倍稀释。
小心地将稀释后的血液叠加在密度梯度分离液的上层,保持清晰的界面。
在室温下进行水平离心(如2000 rpm,20分钟,升降速要慢)。
离心后,试管中会形成清晰的层次:最上层是血浆和血小板,中间灰白色的薄层是PBMCs,下层是分离液和红细胞/粒细胞。
小心吸取中间的PBMC层,用缓冲液洗涤离心2次,即可获得较纯的单个核细胞。
2. 基于细胞特性的分离方法
当需要更高纯度的特定细胞亚群时,会采用以下技术:
贴壁筛选法:利用某些细胞(如单核细胞、成纤维细胞)能够贴附在培养皿表面生长,而其他细胞(如淋巴细胞)不能贴壁的特性,通过简单的换液操作即可分离。
流式细胞分选术 (FACS):一种高精度、高通量的细胞分选技术。它利用荧光标记的特异性抗体识别细胞表面的特定分子,通过仪器将单个细胞液滴带上不同电荷,在电场中偏转,从而将目标细胞从混合群体中精确地分选出来,纯度可达95%以上。
免疫磁珠法 (MACS):一种操作简便、快速且能获得高纯度细胞的方法。将特异性抗体包被在磁性微球上,与细胞悬液孵育后,抗体与目标细胞结合。然后将混合液通过置于磁场中的分离柱,结合了磁珠的细胞被吸附在柱内,未结合的细胞则流出。移出磁场后,即可洗脱得到高纯度的目标细胞,纯度可达95%-99%。
收货处理:

1、外包装消毒:用75%酒精喷洒瓶身及瓶盖,静置30秒后放入超净台 。
2、静置恢复:将细胞瓶直接放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3–4小时,不建议立即开盖操作 。
3、显微镜检查:
观察细胞贴壁率、形态是否正常;
拍照记录(建议40x、100x、200x),作为售后依据 ;
若漂浮细胞较多,可静置过夜观察是否重新贴壁。
4、处理决策:
贴壁率 <85%:更换培养基继续观察;
贴壁率 ≥85%:可直接传代。
公司正在出售的产品:
| Michel固着液 |
环指蛋白135抗体 |
| 调料甲酸比色法定量检测试剂盒 |
细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒 |
| 细菌同化型硝酸盐还原酶活性比色法定量检测试剂盒 |
真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性滤膜染色试剂盒(带滤膜) |
| PROTEASE酶解法石蜡切片抗原修复处理试剂盒 |
OTUD7A蛋白抗体 |
| 载玻片细胞BAX蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
富含半胱氨酸/丝氨酸的核蛋白1抗体 |
| 组织NEK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
猪乙脑病毒包膜蛋白抗体 |
| 细胞PAR-1蛋白表达比色法定量检测试剂盒 |
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白抗体 |
| AF680标记的1号染色体开放阅读框138抗体 |
DIRAS2蛋白抗体 |
| 40%ACRYLAMIDE-BIS(37.5:1)溶液 |
内皮素2抗体 |
| 细胞羟赖(hydroxylisine)含量比色法定量检测试剂盒 |
蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体 |
| 细胞磷酸二酯酶5(PDE5)活性荧光定量检测试剂盒 |
大鼠食管成纤维细胞AAGAB蛋白抗体 |
| 胰岛素生长因子样家族成员4抗体 |
联会复合体蛋白3抗体 |
| 鸡心脏微血管内皮细胞 |
人乳腺导管上皮细胞 |
| Rabbit Skeletal Muscle Satellite Cells |
Porcine primary mammary gland fibroblasts |
原代细胞与细胞系的比较:
比较维度 原代细胞 细胞系
来源 直接从活体组织分离 由原代细胞或肿瘤组织经长期传代或转化形成
生物学真实性 高,最接近体内状态 较低,长期培养可能导致特性丢失或改变
遗传背景 稳定,通常为二倍体 不稳定,常发生基因突变和染色体异常
细胞群体 异质性,可能包含多种细胞 均质性,来源于单个克隆,背景单一
增殖能力 有限,会衰老死亡 无限,可长期传代
主要应用 药物筛选、毒理研究、个性化医疗 高通量筛选、机制研究、大规模生产