大鼠气管上皮分离自气管组织;气管(Trachea),呼吸器官的一部分;为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘,与环状软骨相连;向下至第四、五胸椎体(相当胸骨角平面)交界处,分左、右主支气管,分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成,有弹性,软骨为“C”字形的软骨环,缺口向后,各软骨环以韧带连接起来,环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接,保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜,表面覆盖纤毛上皮,粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒,纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出,以净化吸入的气体。气管上皮是气道与外界环境接触的道防线,不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞,还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子从而参与气道炎症及免疫反应。体外培养的原代气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性,因此,在基础及临床研究中极为重要。
方法简介 公司实验室分离的大鼠气管上皮采用-混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠气管上皮经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
关键操作流程:
原代细胞的制备是整个实验成功的基础,其核心在于将组织分散成单个活细胞。
1. 组织取材与预处理
无菌操作:整个过程必须在超净台内严格无菌进行,所有器械和溶液都需灭菌。
快速处理:组织从生物体取出后应尽快处理,以维持细胞活力。若不能立即处理,需在4℃条件下短期保存。
清洗与剪切:用预冷的PBS或Hank's液反复冲洗组织,去除血污和杂物。然后用无菌眼科剪将组织剪成约1mm³的微小碎块。
2. 细胞分离方法
根据组织类型和研究目的,主要有以下三种分离策略:
分离方法 原理与适用组织 优点 缺点
酶消化法 利用酶(如胰蛋白酶、胶原酶)降解细胞间质,适用于肝、肾、皮肤、肿瘤等大多数实体组织。 细胞得率高,分离效果好,是最常用的方法。 酶可能对细胞造成损伤,需精确控制消化时间和温度。
组织块培养法 将组织块直接贴附于培养瓶,细胞从边缘自然迁出。适用于上皮、胚胎等细胞间质少的组织。 操作简单,对细胞损伤小,能较好保留细胞特性。 细胞迁出和增殖周期长,得率相对较低。
机械分散法 通过剪切、研磨、筛网过滤或吸管吹打等物理方式分散组织,适用于脑组织等柔软样本。 快速,避免了酶对细胞的潜在毒性。 细胞损伤大,得率和存活率低,易形成细胞团块。
常用酶简介
胰蛋白酶 (Trypsin):作用强,适用于细胞间质较少的软组织。其活性依赖不含钙、镁离子的环境。
胶原酶 (Collagenase):特异性水解胶原蛋白,对细胞损伤小,尤其适用于富含结缔组织的坚硬器官(如乳腺、骨、软骨)。
3. 细胞培养与观察
终止消化:酶消化后,需加入含血清的培养基来终止反应,因为血清中含有抑制胰蛋白酶活性的因子。
过滤与接种:通过细胞滤网过滤,去除未消化的组织块,离心收集细胞后用完全培养基重悬,接种到培养瓶中。
耐心观察:原代细胞生长通常较缓慢,可能需要24小时甚至更长时间才能在镜下观察到贴壁的细胞。
常见难点与解决方案:
原代培养常被称为“玄学”,主要因为以下痛点:
1. 细胞不贴壁或死亡率高
原因: 消化过度、物理损伤或“失巢凋亡”。
对策: 优化酶浓度和时间;在培养基中添加 ROCK抑制剂 或特定的贴壁因子(如层粘连蛋白、纤连蛋白)。
2. 杂细胞污染(主要是成纤维细胞)
现象: 成纤维细胞生长极快,会迅速淹没目的细胞(如上皮细胞)。
对策:
差速贴壁法: 利用成纤维细胞贴壁快(1-2小时)的特性,先让其在培养瓶贴壁,收集未贴壁的悬液(含目的细胞)进行培养。
抑制剂法: 使用阿糖胞苷或特定抗体清除杂细胞。
3. 批次差异大
原因: 供体年龄、健康状况、取材部位不同。
对策: 尽量使用同一批次冻存的细胞进行实验;或者在实验设计时增加生物学重复。
公司正在出售的产品:
| Zinc固着液 |
肌动蛋白α1单克隆抗体 |
| 植物总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒 |
真菌/酵母细胞染色质免疫沉淀分析(CHIP)完全试剂盒(包括抗体) |
| PH3-4显色(METHYL ORANGE)指示溶液 |
动物多核白细胞分离试剂盒 |
| HRP底物TMB缓冲溶液 |
PDZ结构域蛋白GOPC抗体 |
| 石蜡切片组织AKT蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
钙激活蛋白酶14抗体 |
| 组织IKKβ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
转录同源蛋白质CUX2抗体 |
| 细胞HISTONE H3蛋白表达比色法定量检测试剂盒 |
通用转录因子III/WBSCR11抗体 |
| AF680标记的上皮细胞粘附分子(CD326)抗体 |
DR1相关蛋白1抗体 |
| 肿瘤检测试剂专题 |
磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗体 |
| 细菌亚硝酸盐还原酶总活性比色法定量检测试剂盒 |
蛋白质精氨酸亚型2抗体 |
| 组织JAK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
大鼠气管上皮细胞aFGF胞内结合蛋白抗体 |
| 遗传性前列腺癌蛋白2抗体 |
磷酸甘露糖异构酶抗体 |
| 人肾癌组织源细胞 |
大鼠前列腺基底细胞 |
| Rabbit Articular Chondrocyte Cells |
Sheep primary pulmonary fibroblasts |