原代细胞(Primary Cells)是指直接从生物体组织或器官中分离并立即进行体外培养的初始细胞。
与经过长期传代、遗传特性可能改变的细胞系不同,原代细胞因其离体时间短,
最大限度地保留了来源组织的原始遗传背景、生物学特性和生理功能,能够更真实地反映细胞在体内的状态。
尽管其增殖能力有限,培养难度相对较高,但凭借其高度的体内相关性,原代细胞在药物筛选、
毒理研究、疾病模型构建、基因功能分析及再生医学等前沿领域,已成为不可或缺的关键研究工具
细胞简介:

大鼠气管平滑肌分离自气管组织;气管(Trachea),呼吸器官的一部分;为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘,与环状软骨相连;向下至第四、五胸椎体(相当胸骨角平面)交界处,分左、右主支气管,分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成,有弹性,软骨为“C”字形的软骨环,缺口向后,各软骨环以韧带连接起来,环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接,保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜,表面覆盖纤毛上皮,粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒,纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出,以净化吸入的气体。气管平滑肌是气管的重要结构组成之一,在机体的正常生理过程中发挥着重要作用;能够保持气道张力,维持气道管状形态,从而有利于气体流通,保持肺部通气。气管平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。气管平滑肌细胞的异常是呼吸道疾病的重要病理特征之一,其增生、肥大是气道重塑的关键。
方法简介 公司实验室分离的大鼠气管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠气管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞分离步骤:
从液体样本中分离细胞
对于血液、骨髓、腹水等本身就是细胞悬液的样本,分离过程主要基于细胞的物理特性(如密度、大小)或生物学特性(如表面标志物)进行纯化。
1. 密度梯度离心法
这是从外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs,主要包括淋巴细胞和单核细胞)最常用的方法。
原理:利用不同细胞的密度差异。通过离心,使细胞在特定密度的分离液(如Ficoll-Hypaque,密度为1.077 g/ml)中分层。
简要步骤:
将抗凝血用PBS等倍稀释。
小心地将稀释后的血液叠加在密度梯度分离液的上层,保持清晰的界面。
在室温下进行水平离心(如2000 rpm,20分钟,升降速要慢)。
离心后,试管中会形成清晰的层次:最上层是血浆和血小板,中间灰白色的薄层是PBMCs,下层是分离液和红细胞/粒细胞。
小心吸取中间的PBMC层,用缓冲液洗涤离心2次,即可获得较纯的单个核细胞。
2. 基于细胞特性的分离方法
当需要更高纯度的特定细胞亚群时,会采用以下技术:
贴壁筛选法:利用某些细胞(如单核细胞、成纤维细胞)能够贴附在培养皿表面生长,而其他细胞(如淋巴细胞)不能贴壁的特性,通过简单的换液操作即可分离。
流式细胞分选术 (FACS):一种高精度、高通量的细胞分选技术。它利用荧光标记的特异性抗体识别细胞表面的特定分子,通过仪器将单个细胞液滴带上不同电荷,在电场中偏转,从而将目标细胞从混合群体中精确地分选出来,纯度可达95%以上。
免疫磁珠法 (MACS):一种操作简便、快速且能获得高纯度细胞的方法。将特异性抗体包被在磁性微球上,与细胞悬液孵育后,抗体与目标细胞结合。然后将混合液通过置于磁场中的分离柱,结合了磁珠的细胞被吸附在柱内,未结合的细胞则流出。移出磁场后,即可洗脱得到高纯度的目标细胞,纯度可达95%-99%。
收货处理:

1、外包装消毒:用75%酒精喷洒瓶身及瓶盖,静置30秒后放入超净台 。
2、静置恢复:将细胞瓶直接放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3–4小时,不建议立即开盖操作 。
3、显微镜检查:
观察细胞贴壁率、形态是否正常;
拍照记录(建议40x、100x、200x),作为售后依据 ;
若漂浮细胞较多,可静置过夜观察是否重新贴壁。
4、处理决策:
贴壁率 <85%:更换培养基继续观察;
贴壁率 ≥85%:可直接传代。
公司正在出售的产品:
| 血液二胺氧化酶(DAO)活性荧光定量检测试剂盒 |
基质细胞衍生因子2抗体 |
| 果菜比色法定量检测试剂盒 |
GST融合蛋白甘肽树脂再生试剂盒 |
| 动物细胞/组织异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase;IDH)电泳分析试剂盒 |
冰冻切片TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒 |
| HRP底物OPD缓冲溶液 |
PDZ结构域PDZK9蛋白抗体 |
| 载玻片细胞AKT蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4抗体 |
| 组织MAPKAP KINASE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
转录因子E2F-4抗体 |
| EGFR 蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
通用转录因子IIF亚基2/TFIIF RAP 30抗体 |
| AF680标记的上皮钙粘附分子抗体 |
Evx1蛋白抗体 |
| 3' 端DNA转移酶标记鉴定试剂盒 |
磷脂酰肌醇PREX2抗体 |
| 细菌同化型硝酸盐还原酶活性比色法定量检测试剂盒 |
低分子量神经丝蛋白抗体 |
| 组织PDGFRβ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
大鼠气管平滑肌细胞Ⅰ型补体受体(C3b/C4b受体)抗体 |
| 遗传性脉络膜缺乏症相关蛋白样抗体 |
磷酸甘露糖变位酶2抗体 |
| 大鼠肠动脉内皮细胞 |
牛骨骼肌微血管内皮细胞 |
| Human Ovarian Microvascular Endothelial Cells |
Mouse Peripheral Blood-Derived Endothelial Progenitor Cells |
原代细胞与细胞系的比较:
比较维度 原代细胞 细胞系
来源 直接从活体组织分离 由原代细胞或肿瘤组织经长期传代或转化形成
生物学真实性 高,最接近体内状态 较低,长期培养可能导致特性丢失或改变
遗传背景 稳定,通常为二倍体 不稳定,常发生基因突变和染色体异常
细胞群体 异质性,可能包含多种细胞 均质性,来源于单个克隆,背景单一
增殖能力 有限,会衰老死亡 无限,可长期传代
主要应用 药物筛选、毒理研究、个性化医疗 高通量筛选、机制研究、大规模生产