原代细胞(Primary Cells)是指直接从生物体组织或器官中分离并立即进行体外培养的初始细胞。
与经过长期传代、遗传特性可能改变的细胞系不同,原代细胞因其离体时间短,
最大限度地保留了来源组织的原始遗传背景、生物学特性和生理功能,能够更真实地反映细胞在体内的状态。
尽管其增殖能力有限,培养难度相对较高,但凭借其高度的体内相关性,原代细胞在药物筛选、
毒理研究、疾病模型构建、基因功能分析及再生医学等前沿领域,已成为不可或缺的关键研究工具
细胞简介:

大鼠角膜内皮分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神经末梢,如有外物接触角膜,眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明,角膜并没有血管,透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一,而角膜内皮细胞(CEC)在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞,构成了后弹力层和房水之间的物理屏障,通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分,维持角膜的半脱水状态,保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱,常导致角膜水肿而使角膜部分甚至失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有:①角膜是的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能;②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用;③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性,维持角膜和房水内Na+梯度,防止水分渗入角膜内,维持角膜实质层相对脱水状态,维持透明性。
方法简介 公司实验室分离的大鼠角膜内皮采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠角膜内皮经NSE(神经元特异性烯醇化酶)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件 PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 内皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞分离步骤:
从液体样本中分离细胞
对于血液、骨髓、腹水等本身就是细胞悬液的样本,分离过程主要基于细胞的物理特性(如密度、大小)或生物学特性(如表面标志物)进行纯化。
1. 密度梯度离心法
这是从外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs,主要包括淋巴细胞和单核细胞)最常用的方法。
原理:利用不同细胞的密度差异。通过离心,使细胞在特定密度的分离液(如Ficoll-Hypaque,密度为1.077 g/ml)中分层。
简要步骤:
将抗凝血用PBS等倍稀释。
小心地将稀释后的血液叠加在密度梯度分离液的上层,保持清晰的界面。
在室温下进行水平离心(如2000 rpm,20分钟,升降速要慢)。
离心后,试管中会形成清晰的层次:最上层是血浆和血小板,中间灰白色的薄层是PBMCs,下层是分离液和红细胞/粒细胞。
小心吸取中间的PBMC层,用缓冲液洗涤离心2次,即可获得较纯的单个核细胞。
2. 基于细胞特性的分离方法
当需要更高纯度的特定细胞亚群时,会采用以下技术:
贴壁筛选法:利用某些细胞(如单核细胞、成纤维细胞)能够贴附在培养皿表面生长,而其他细胞(如淋巴细胞)不能贴壁的特性,通过简单的换液操作即可分离。
流式细胞分选术 (FACS):一种高精度、高通量的细胞分选技术。它利用荧光标记的特异性抗体识别细胞表面的特定分子,通过仪器将单个细胞液滴带上不同电荷,在电场中偏转,从而将目标细胞从混合群体中精确地分选出来,纯度可达95%以上。
免疫磁珠法 (MACS):一种操作简便、快速且能获得高纯度细胞的方法。将特异性抗体包被在磁性微球上,与细胞悬液孵育后,抗体与目标细胞结合。然后将混合液通过置于磁场中的分离柱,结合了磁珠的细胞被吸附在柱内,未结合的细胞则流出。移出磁场后,即可洗脱得到高纯度的目标细胞,纯度可达95%-99%。
收货处理:

1、外包装消毒:用75%酒精喷洒瓶身及瓶盖,静置30秒后放入超净台 。
2、静置恢复:将细胞瓶直接放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3–4小时,不建议立即开盖操作 。
3、显微镜检查:
观察细胞贴壁率、形态是否正常;
拍照记录(建议40x、100x、200x),作为售后依据 ;
若漂浮细胞较多,可静置过夜观察是否重新贴壁。
4、处理决策:
贴壁率 <85%:更换培养基继续观察;
贴壁率 ≥85%:可直接传代。
公司正在出售的产品:
| 组织半胱-6(CASPASE-6)活性荧光定量检测试剂盒 |
环指蛋白187抗体 |
| 非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒 |
3’末端RNA探针同位素([α32P]dATP)聚合酶标记试剂盒 |
| 细胞HHV6-B(HUMAN HERPESVIRUS 6-B)病毒 |
活体组织氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(过氧亚硝基阴离子) |
| DNA甲基转移酶-3B(DNMT-3B)活性酶连续循环比色法 |
PE标记小鼠CD44单克隆抗体 |
| 载玻片细胞TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
干扰素诱导35蛋白抗体 |
| 细胞SPHK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
肿瘤/睾丸抗原77抗体 |
| 石蜡切片组织P27蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体 |
| 磷酸化干扰素调节因子3重组兔单克隆抗体 |
DNAJC11蛋白抗体 |
| 蛋白/抗体标记试剂专题 |
磷脂特异性磷脂酶A1抗体 |
| 线虫甲磺酸乙脂(EMS)诱导突变试剂盒 |
促进成骨细胞分化因子/GDPD2抗体 |
| 细胞PKA激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
大鼠角膜内皮细胞4号染色体开放阅读框28抗体 |
| 嗅觉受体52E1抗体 |
卷曲螺旋结构域蛋白58抗体 |
| 人骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞) |
人海绵体平滑肌细胞 |
| Rat Cardiac Fibroblast Cells |
Rabbit femoral head microvascular endothelial cells |
原代细胞与细胞系的比较:
比较维度 原代细胞 细胞系
来源 直接从活体组织分离 由原代细胞或肿瘤组织经长期传代或转化形成
生物学真实性 高,最接近体内状态 较低,长期培养可能导致特性丢失或改变
遗传背景 稳定,通常为二倍体 不稳定,常发生基因突变和染色体异常
细胞群体 异质性,可能包含多种细胞 均质性,来源于单个克隆,背景单一
增殖能力 有限,会衰老死亡 无限,可长期传代
主要应用 药物筛选、毒理研究、个性化医疗 高通量筛选、机制研究、大规模生产