细胞简介:

大鼠肝星形分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。肝星形细胞(HSC)又名肝贮脂细胞、贮存细胞、窦周细胞、Ito细胞等,是肝脏细胞外基质的主要来源。HSC在激活后可进一步转化为肌成纤维细胞样细胞,各种可导致肝纤维化的因素均将HSC作为终靶细胞。正常情况下,HSC处于静止状态,当肝脏发生炎症反应或受到机械刺激等损伤时,HSC的表型由静止型转变为激活型,激活的HSC可通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成及肝内结构的重建,此过程也是肝纤维化的中心环节。肝星形细胞分布于肝脏的Disse间隙内,是合成、分泌细胞外基质的主要来源,在肝纤维化的发生中处于重要地位。肝星形细胞是肝脏的间充质细胞,约占肝脏细胞总数的8%-13%。作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群,肝星形细胞不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分,合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构,还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。此外,肝星形细胞能通过合成肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子等促进肝细胞增殖和肝再生。
方法简介 公司实验室分离的大鼠肝星形采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠肝星状经α-SMA、Desmin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
生物学特性:
原代细胞的核心价值在于其高度的生理相关性,这主要体现在以下几个方面:
高度模拟体内状态
原代细胞直接从机体取出,离体时间短,因此最大程度地保留了其来源组织的遗传特征、基因表达谱、代谢功能和细胞间相互作用。这使得它们能够真实地反映细胞在体内的生长状态和对各种刺激的反应。
有限的增殖能力
与可以无限增殖的细胞系不同,原代细胞是正常的、未经转化的细胞,其分裂能力有限。它们通常只能传代10次以内(通常将第1至第10代的细胞统称为原代细胞),随后便会进入衰老期并死亡,这一现象与“海弗利克极限”有关。
遗传稳定性
原代细胞通常保持正常的二倍体染色体数目,遗传物质未发生改变。这确保了实验结果的准确性,避免了因长期体外培养导致的基因突变或染色体异常。
细胞异质性
从组织中分离的原代细胞群体可能包含多种细胞类型,例如在培养上皮细胞时,常常会伴随有成纤维细胞的生长。这种异质性在一定程度上反映了体内组织的真实构成,但也对细胞的纯化提出了要求。
基本参数:
在实际操作和应用中,原代细胞表现出以下基本参数特征:
参数维度 特征描述
来源与制备 直接来源于人或动物的新鲜组织、器官、外周血或胚胎。通常使用胰蛋白酶、胶原酶等进行酶消化,或采用机械法分散获得单个细胞悬液。
培养条件 培养要求较为苛刻,需要特定的培养基、生长因子和适宜的贴壁表面(如经细胞外基质蛋白包被),且对无菌操作要求极高。
生长特性 生长相对缓慢,增殖能力弱。不同来源的细胞增殖能力不同,例如骨骼肌细胞可传代10-12代,而上皮细胞通常在3-4代后成纤维细胞会成为优势细胞。
成本与周期 分离和培养过程耗时、费力,且成本较高。由于增殖能力有限,不适合大规模、长期的实验。
公司正在出售的产品:
| 免疫荧光样品固着液(Michel固着液) |
环指蛋白165抗体 |
| 柠檬酸待测样品处理试剂盒 |
咖啡糖精(saccharin)含量薄层色谱法定性检测试剂盒 |
| DH5α钙转感受态细菌 |
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 |
| 6倍丙三醇DNA电泳上样缓冲液 |
PE-Cy5.5标记人CD56 (NCAM)单克隆抗体 |
| 石蜡切片组织INSULIN 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
干扰素alpha 5蛋白抗体 |
| 组织溶酶体型酸性磷酸酶活性荧光定量检测试剂盒 |
植物延展素-β |
| 载玻片细胞PAR-1蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SRPK7抗体 |
| 磷酸化转录激活因子MYB重组兔单克隆抗体 |
DMXL2蛋白抗体 |
| 5-TAMRA蛋白标记试剂盒 |
镁转运蛋白1抗体 |
| 体液HHV6-B(HUMAN HERPESVIRUS 6-B)病毒定性检测试剂盒 |
成骨相关转录因子抗体 |
| 组织CDK6/CYC D3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
大鼠肝星状细胞ADCK4蛋白抗体 |
| 嗅觉受体5K2抗体 |
卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD1抗体 |
| 大鼠心脏微血管周细胞 |
兔骨髓肥大细胞 |
| Rat Pulmonary Artery Endothelial Cells |
Porcine primary bladder epithelial cells |
关键注意事项:
无菌操作 这是细胞培养的生命线。操作前需对超净台进行紫外灭菌,操作过程要规范、迅速,避免污染。
消化控制 酶消化是关键步骤。消化时间过长会损伤细胞,过短则解离不充分。需根据组织类型和酶活性灵活调整。
细胞状态 原代细胞非常脆弱,尤其是首次传代时,应保证较高的接种密度,否则细胞难以生长。
冻存策略 原代细胞不建议在P0代直接冻存。通常建议在细胞状态较好的P2或P3代进行冻存,以保证复苏后的活性。