原代细胞(Primary Cells)是指直接从生物体组织或器官中分离并立即进行体外培养的初始细胞。
与经过长期传代、遗传特性可能改变的细胞系不同,原代细胞因其离体时间短,
最大限度地保留了来源组织的原始遗传背景、生物学特性和生理功能,能够更真实地反映细胞在体内的状态。
尽管其增殖能力有限,培养难度相对较高,但凭借其高度的体内相关性,原代细胞在药物筛选、
毒理研究、疾病模型构建、基因功能分析及再生医学等前沿领域,已成为不可或缺的关键研究工具
细胞简介:

大鼠肝窦内皮分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。肝窦内皮细胞(SEC)是肝脏内所占比例高的非实质细胞,位于肝窦腔与肝细胞之间,具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于拥有一般细胞所没有的窗孔结构、细胞间连结松散、内皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,从而达到快速交换各种大小分子的目的。肝在遭到多种病原侵袭时,肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失,内皮下基膜形成,产生类似于连续型毛细血管的结构,这一过程称为肝窦毛细血管化。它由多种因素引起,其过程极复杂,在多种肝病的发病前期阶段均有出现,近年来受到广泛关注。
方法简介 公司实验室分离的大鼠肝窦内皮采用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法,并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠肝窦内皮经CD31、CD14免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件 PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 内皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞分离步骤:
从液体样本中分离细胞
对于血液、骨髓、腹水等本身就是细胞悬液的样本,分离过程主要基于细胞的物理特性(如密度、大小)或生物学特性(如表面标志物)进行纯化。
1. 密度梯度离心法
这是从外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs,主要包括淋巴细胞和单核细胞)最常用的方法。
原理:利用不同细胞的密度差异。通过离心,使细胞在特定密度的分离液(如Ficoll-Hypaque,密度为1.077 g/ml)中分层。
简要步骤:
将抗凝血用PBS等倍稀释。
小心地将稀释后的血液叠加在密度梯度分离液的上层,保持清晰的界面。
在室温下进行水平离心(如2000 rpm,20分钟,升降速要慢)。
离心后,试管中会形成清晰的层次:最上层是血浆和血小板,中间灰白色的薄层是PBMCs,下层是分离液和红细胞/粒细胞。
小心吸取中间的PBMC层,用缓冲液洗涤离心2次,即可获得较纯的单个核细胞。
2. 基于细胞特性的分离方法
当需要更高纯度的特定细胞亚群时,会采用以下技术:
贴壁筛选法:利用某些细胞(如单核细胞、成纤维细胞)能够贴附在培养皿表面生长,而其他细胞(如淋巴细胞)不能贴壁的特性,通过简单的换液操作即可分离。
流式细胞分选术 (FACS):一种高精度、高通量的细胞分选技术。它利用荧光标记的特异性抗体识别细胞表面的特定分子,通过仪器将单个细胞液滴带上不同电荷,在电场中偏转,从而将目标细胞从混合群体中精确地分选出来,纯度可达95%以上。
免疫磁珠法 (MACS):一种操作简便、快速且能获得高纯度细胞的方法。将特异性抗体包被在磁性微球上,与细胞悬液孵育后,抗体与目标细胞结合。然后将混合液通过置于磁场中的分离柱,结合了磁珠的细胞被吸附在柱内,未结合的细胞则流出。移出磁场后,即可洗脱得到高纯度的目标细胞,纯度可达95%-99%。
收货处理:

1、外包装消毒:用75%酒精喷洒瓶身及瓶盖,静置30秒后放入超净台 。
2、静置恢复:将细胞瓶直接放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3–4小时,不建议立即开盖操作 。
3、显微镜检查:
观察细胞贴壁率、形态是否正常;
拍照记录(建议40x、100x、200x),作为售后依据 ;
若漂浮细胞较多,可静置过夜观察是否重新贴壁。
4、处理决策:
贴壁率 <85%:更换培养基继续观察;
贴壁率 ≥85%:可直接传代。
公司正在出售的产品:
| 骨组织固着液 |
环指蛋白160抗体 |
| 饮料柠檬酸比色法定量检测试剂盒 |
核酸蛋白结合反应试剂盒 |
| 蓝藻菌A+ 培养液 |
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒 |
| 10倍Tris浓缩缓冲溶液 |
OTOL1抗体 |
| 冰冻切片组织PDGF-B蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
副肿瘤性神经元抗原/副肿瘤抗原Ma2抗体 |
| 细胞溶酶体型酸性磷酸酶活性荧光定量检测试剂盒 |
转录起始因子RAP30抗体 |
| CASPASE-6蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 |
调亡诱导因子家族蛋白PEF1抗体 |
| AF680标记的骨桥蛋白抗体 |
DMXL1蛋白抗体 |
| CY3蛋白标记试剂盒 |
磷酸化粘着斑激酶抗体 |
| 体液羟赖(HYL)含量比色法定量检测试剂盒 |
蛋白酶体β亚基11抗体 |
| 组织腺苷酸环化酶(Adenylate Cyclase)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒 |
大鼠肝窦内皮细胞ADP核糖基化因子4抗体 |
| 胰岛素诱导基因2抗体 |
淋巴细胞性白血病相关序列1抗体 |
| 人气管平滑肌细胞 |
大鼠胃成纤维细胞 |
| Human Umbilical Artery Endothelial Cells |
Rabbit intestinal fibroblasts |
原代细胞与细胞系的比较:
比较维度 原代细胞 细胞系
来源 直接从活体组织分离 由原代细胞或肿瘤组织经长期传代或转化形成
生物学真实性 高,最接近体内状态 较低,长期培养可能导致特性丢失或改变
遗传背景 稳定,通常为二倍体 不稳定,常发生基因突变和染色体异常
细胞群体 异质性,可能包含多种细胞 均质性,来源于单个克隆,背景单一
增殖能力 有限,会衰老死亡 无限,可长期传代
主要应用 药物筛选、毒理研究、个性化医疗 高通量筛选、机制研究、大规模生产