细胞简介:

大鼠附睾上皮分离自附睾组织;附睾(Epididymis)是一个由曲折、细小的管子构成的器官,一端接着输精管(Ductusdeferens),一端接着睾丸(Testis)的曲细精管,具体结构主要包括输出小管和附睾管。附睾紧贴睾丸的上端和后缘,可分为头、体、尾三部。精子离开睾丸后通过输出小管进入附睾。附睾具有暂存精液并分泌附睾液营养精子的功能,以促进精子的进一步成熟附睾的功能是暂存精子,促进精子的进一步成熟。精子在附睾内获得运动能力,总共停留8~17天,终达到功能上的成熟。在这个过程中,精子除了自身的因素,还受到附睾微环境的影响,这包括了一系列的物理、化学变化和精子形态的改变。可以说,附睾微环境正常稳定是附睾发挥促成熟这一功能的必要条件。若附睾的功能发生异常,精子则不能成熟,引起不育。附睾上皮含有主细胞、基细胞、亮细胞等几种类型细胞。基细胞,其顶部离附睾管腔有一定距离,在附睾各部分,其形态没有差别,一般认为是贮备细胞;另一种主细胞,是维持附睾生理功能的物质基础,在各区段的主细胞形态结构差别很大,这也反映出各区段的生理功能的差异。除上皮细胞外,附睾的管壁组织结构也有规律性的变化,附睾管起始段平滑肌有自发地节律性收缩,而尾部平滑肌就没有这种特点,仅在射精一瞬间出现强烈的节律收缩。作为负责提供适合精子成熟微环境的附睾,具有活跃的分泌与吸收功能。其中,附睾上皮的电解质和水分的转运,对保持附睾内合适的离子浓度和酸碱度,为精子成熟提供适宜的环境起着相当重要的作用。睾丸的支持细胞每天能产生大量睾网液,如一只公羊每天约能分泌40毫升睾网液,而从附睾排出的只不过几百微升,也就是说睾丸分泌液有99%被附睾上皮重新吸收回体内。动物实验表明,结扎输精管时睾丸不会肿胀,但若结扎睾丸输出小管,睾丸天就会肿胀,这就充分证实了附睾存在着强有力的吸收功能,但是重新吸收的意义尚不清楚。体外培养附睾上皮细胞对精子的发育、成熟,,附睾生理基础功能研究具有重要意义。
方法简介 实验室分离的大鼠附睾上皮采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测 实验室分离的大鼠附睾上皮经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件:鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基:含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:上皮细胞样
传代特性:可传1-2代
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠附睾上皮体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态
生物学特性:
原代细胞的核心价值在于其高度的生理相关性,这主要体现在以下几个方面:
高度模拟体内状态
原代细胞直接从机体取出,离体时间短,因此最大程度地保留了其来源组织的遗传特征、基因表达谱、代谢功能和细胞间相互作用。这使得它们能够真实地反映细胞在体内的生长状态和对各种刺激的反应。
有限的增殖能力
与可以无限增殖的细胞系不同,原代细胞是正常的、未经转化的细胞,其分裂能力有限。它们通常只能传代10次以内(通常将第1至第10代的细胞统称为原代细胞),随后便会进入衰老期并死亡,这一现象与“海弗利克极限”有关。
遗传稳定性
原代细胞通常保持正常的二倍体染色体数目,遗传物质未发生改变。这确保了实验结果的准确性,避免了因长期体外培养导致的基因突变或染色体异常。
细胞异质性
从组织中分离的原代细胞群体可能包含多种细胞类型,例如在培养上皮细胞时,常常会伴随有成纤维细胞的生长。这种异质性在一定程度上反映了体内组织的真实构成,但也对细胞的纯化提出了要求。
基本参数:
在实际操作和应用中,原代细胞表现出以下基本参数特征:
参数维度 特征描述
来源与制备 直接来源于人或动物的新鲜组织、器官、外周血或胚胎。通常使用胰蛋白酶、胶原酶等进行酶消化,或采用机械法分散获得单个细胞悬液。
培养条件 培养要求较为苛刻,需要特定的培养基、生长因子和适宜的贴壁表面(如经细胞外基质蛋白包被),且对无菌操作要求极高。
生长特性 生长相对缓慢,增殖能力弱。不同来源的细胞增殖能力不同,例如骨骼肌细胞可传代10-12代,而上皮细胞通常在3-4代后成纤维细胞会成为优势细胞。
成本与周期 分离和培养过程耗时、费力,且成本较高。由于增殖能力有限,不适合大规模、长期的实验。
公司正在出售的产品:
| 软组织固着液(Bouin固着液) |
激素原转化酶5/6抗体 |
| 酒类柠檬酸比色法定量检测试剂盒 |
核酸-蛋白结合凝胶电泳定量分析(McKay)试剂专题 |
| 小量微藻菌基因组DNA氯化铯萃取试剂盒(高多糖/酚) |
细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 |
| 10倍TBST浓缩缓冲清理溶液 |
PE标记人CD62E/CD62P单克隆抗体 |
| 载玻片细胞PDGF-A蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
复制激活因子C1抗体 |
| 纯化溶酶体酸性磷酸酶活性荧光定量检测试剂盒 |
转录激活蛋白crsp70抗体 |
| 石蜡切片组织CASPASE-7蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
铁反应元件结合蛋白2抗体 |
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E选择素抗体 |
| [35S]-Met细胞代谢标记试剂盒 |
磷酸化着丝粒蛋白A |
| 组织WNV(WEST NILE)病毒定量PCR扩增检测试剂盒 |
蛋白酶体PSMα4/20S Proteasome α4抗体 |
| 体液腺苷酸环化酶(Adenylate Cyclase)活性荧光定量检测试剂盒 |
大鼠附睾上皮细胞ADP核糖基化样因子ARL3抗体 |
| 胰高血糖素样肽-1抗体 |
磷酸丙糖异构酶抗体 |
| 人气管上皮细胞 |
大鼠外根鞘细胞 |
| Rabbit Intrahepatic Bile Duct Epithelial Cells |
Rabbit annulus fibrosus cell |
关键注意事项:
无菌操作 这是细胞培养的生命线。操作前需对超净台进行紫外灭菌,操作过程要规范、迅速,避免污染。
消化控制 酶消化是关键步骤。消化时间过长会损伤细胞,过短则解离不充分。需根据组织类型和酶活性灵活调整。
细胞状态 原代细胞非常脆弱,尤其是首次传代时,应保证较高的接种密度,否则细胞难以生长。
冻存策略 原代细胞不建议在P0代直接冻存。通常建议在细胞状态较好的P2或P3代进行冻存,以保证复苏后的活性。