产品概述
芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白4抗体是针对具有脱乙酰基酶活性的功能蛋白的特异性抗体。这类蛋白主要参与内源性酰胺类物质的代谢调控,通过催化脱乙酰基反应,调节其生物活性,其功能异常与神经系统疾病、代谢性疾病等相关。该抗体多以兔多克隆或单克隆形式存在,经过亲和纯化处理,具有高特异性和灵敏度,适用于免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)、酶活性检测配套实验等,能精准检测目标蛋白的表达水平与定位,为研究内源性物质代谢调控及相关疾病发病机制提供重要工具。
产品基本信息
中文名称:芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白4抗体
英文名称:Arylamine N-Acetyltransferase-like Protein 4 Antibody
别 名:Aadacl4; ADCL4_HUMAN; Arylacetamide deacetylase like 4; Arylacetamide deacetylase-like 4.
研究领域:肿瘤 心血管 细胞生物 信号转导
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应;(predicted: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, )
产品应用:WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量:46kDa
细胞定位:细胞膜
性 状:Liquid
浓 度:1mg/ml
免 疫 原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human AADACL4: 334-380/407
亚 型:IgG
纯化方法:affinity purified by Protein A
缓 冲 液:0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
实验操作过程建议
Western Blot
凝胶制备:分离胶浓度根据靶蛋白分子量选择(如20kDa用15%胶,100kDa用8%胶);
转膜:用湿转或半干转,转膜电流/电压根据蛋白分子量调整,小分子蛋白缩短转膜时间,大分子蛋白延长时间;
封闭:用5%脱脂牛奶或BSA封闭1-2小时,避免非特异性结合(磷酸化蛋白检测需用BSA封闭);
抗体孵育:一抗4℃孵育过夜,二抗室温孵育1小时,减少背景信号。
IHC/IF
组织切片:厚度控制在4-6μm,避免过厚导致染色不均;
抗原修复:IHC常用柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)高压修复,IF常用Triton X-100透化,根据抗体说明书选择合适方法;
抗体孵育:IHC用3%H₂O₂灭活内源性过氧化物酶,IF用5%BSA封闭非特异性结合,孵育抗体时注意避光(IF);
染色后处理:IHC用苏木素复染细胞核,IF用DAPI染核,封片时避免产生气泡。
ELISA
包被:用碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释抗原/抗体,4℃包被过夜,确保抗原/抗体均匀吸附在板上;
孵育:严格控制孵育时间和温度,避免出现边缘效应;
洗板:每步洗板3-5次,拍干孔内液体,避免残留未结合的抗体或抗原;
显色:加入底物后避光显色,显色时间根据说明书调整,避免显色过度。
IP
细胞裂解:用温和的非离子型去污剂(如NP-40)裂解细胞,保持蛋白复合物的稳定性;
抗体-磁珠孵育:提前将一抗与Protein A/G磁珠孵育1-2小时,形成抗体-磁珠复合物,减少非特异性结合;
洗涤:用含低浓度去污剂的洗涤液洗涤3-5次,去除非特异性结合的蛋白;
洗脱:用中性pH的洗脱液或煮沸法洗脱,避免蛋白变性。
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实验操作结果判断
WB:条带单一清晰为有效结果,若出现杂带,可能是抗体非特异性结合或蛋白降解;
IHC/IF:阳性信号定位准确为有效结果,若背景过高,可能是封闭不充分或抗体浓度过高;
ELISA:孔间吸光度值变异系数(CV)<10%为有效结果,若CV过大,可能是包被不均或洗板不彻底;
IP:能检测到靶蛋白及相互作用蛋白为有效结果,若未检测到,可能是蛋白相互作用弱或裂解条件不当。