产品概述
膜相关环指蛋白10(MARCH10)抗体是针对MARCH10蛋白的特异性抗体,MARCH10属于膜相关环指蛋白家族,主要定位于细胞膜,参与膜蛋白的泛素化修饰及内吞过程,在免疫细胞分化、病毒感染等过程中发挥作用。该抗体多以兔多克隆或单克隆形式存在,经过Protein A亲和纯化,具有高特异性,可与人类、小鼠、大鼠等物种的MARCH10蛋白发生交叉反应。适用于免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)、免疫沉淀(IP)等实验,能有效识别内源性MARCH10蛋白,为研究其在膜蛋白转运及免疫调节中的功能提供关键工具。
产品基本信息
中文名称:膜相关环指蛋白10抗体
英文名称:Anti-Membrane Associated RING Finger Protein 10 Antibody
别 名:MARCH 10; MARCH X; MARCH-X; MARCH10; MARHA_HUMAN; Membrane associated ring finger (C3HC4) 10; Membrane associated ring finger (C3HC4) 10, E3 ubiquitin protein ligase ; Membrane associated ring finger 10; Membrane associated RING finger protein 10; Membrane-associated RING finger protein 10; Membrane-associated RING-CH protein X; Probable E3 ubiquitin protein ligase MARCH10; Probable E3 ubiquitin-protein ligase MARCH10; Ring finger protein 190; RNF 190; RNF190.
研究领域:细胞生物 免疫学
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应;(predicted: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Sheep, )
产品应用:WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量:91kDa
细胞定位:细胞核 细胞浆
性 状:Liquid
浓 度:1mg/ml
免 疫 原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human MARCH10: 711-808/80
亚 型:IgG
纯化方法:affinity purified by Protein A
缓 冲 液:0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
实验操作过程建议
Western Blot
凝胶制备:分离胶浓度根据靶蛋白分子量选择(如20kDa用15%胶,100kDa用8%胶);
转膜:用湿转或半干转,转膜电流/电压根据蛋白分子量调整,小分子蛋白缩短转膜时间,大分子蛋白延长时间;
封闭:用5%脱脂牛奶或BSA封闭1-2小时,避免非特异性结合(磷酸化蛋白检测需用BSA封闭);
抗体孵育:一抗4℃孵育过夜,二抗室温孵育1小时,减少背景信号。
IHC/IF
组织切片:厚度控制在4-6μm,避免过厚导致染色不均;
抗原修复:IHC常用柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)高压修复,IF常用Triton X-100透化,根据抗体说明书选择合适方法;
抗体孵育:IHC用3%H₂O₂灭活内源性过氧化物酶,IF用5%BSA封闭非特异性结合,孵育抗体时注意避光(IF);
染色后处理:IHC用苏木素复染细胞核,IF用DAPI染核,封片时避免产生气泡。
ELISA
包被:用碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释抗原/抗体,4℃包被过夜,确保抗原/抗体均匀吸附在板上;
孵育:严格控制孵育时间和温度,避免出现边缘效应;
洗板:每步洗板3-5次,拍干孔内液体,避免残留未结合的抗体或抗原;
显色:加入底物后避光显色,显色时间根据说明书调整,避免显色过度。
IP
细胞裂解:用温和的非离子型去污剂(如NP-40)裂解细胞,保持蛋白复合物的稳定性;
抗体-磁珠孵育:提前将一抗与Protein A/G磁珠孵育1-2小时,形成抗体-磁珠复合物,减少非特异性结合;
洗涤:用含低浓度去污剂的洗涤液洗涤3-5次,去除非特异性结合的蛋白;
洗脱:用中性pH的洗脱液或煮沸法洗脱,避免蛋白变性。
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抗体鉴定的关键注意事项
科研实验
新抗体需先通过ELISA和验证效价和特异性,再进行后续实验;
不同种属的抗体交叉反应性不同,实验前需确认抗体适用的样本种属(如人源、小鼠源)。
临床检测
抗体阳性结果需结合临床症状综合判断,部分抗体阳性仅提示感染史(如丙肝抗体阳性需结合HCV-RNA检测判断是否现症感染);
自身抗体检测可能存在假阳性,需多次复查或结合其他指标确诊。