产品概述
膜相关环指蛋白5(MARCH5)抗体是针对MARCH5蛋白的特异性抗体,MARCH5属于膜相关环指蛋白家族,主要定位于线粒体膜,参与线粒体动力学调控、细胞凋亡等过程,其功能异常与肿瘤发生、神经退行性疾病等相关。该抗体多以兔多克隆或单克隆形式存在,可与人类、小鼠、大鼠等物种的MARCH5蛋白发生交叉反应,经过亲和纯化处理,具有高特异性。适用于免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)、免疫沉淀(IP)等多种实验,能有效识别内源性或重组表达的MARCH5蛋白,为研究MARCH5在线粒体功能调控及相关疾病中的作用提供关键工具。
产品基本信息
中文名称:膜相关环指蛋白5抗体
英文名称:Anti-Membrane Associated RING Finger Protein 5 Antibody
别 名:E3 ubiquitin-protein ligase MARCH5; MARCH-V; Membrane-associated RING finger protein 5; Membrane-associated RING-CH protein V; RING finger protein 153.
研究领域:细胞生物 信号转导 细胞周期蛋白 通道蛋白 表观遗传学
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应;(predicted: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, )
产品应用:ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量:31kDa
细胞定位:细胞浆 细胞膜
性 状:Liquid
浓 度:1mg/ml
免 疫 原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human MARCH5: 1-100/278
亚 型:IgG
纯化方法:affinity purified by Protein A
缓 冲 液:0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
抗体的制备过程
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
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抗体的鉴定
1)抗体的效价鉴定:鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2)抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。
3)抗体的亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。