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| 销售商： 上海帛科生物技术有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
基本信息：
中文名称：巴西曲霉
拉丁学名：Aspergillus brasiliensis
安全等级：二级（需在生物安全柜中操作）
提供形式：冻干粉或安瓿瓶
保存条件：
冻干菌种：2–8°C 保存
西林瓶菌种：-20°C 冷冻
复苏后斜面培养物：4°C 短期保藏（不超过1–2个月）
复苏与操作步骤：
安瓿瓶开封：
用75%酒精擦拭瓶身
火焰加热顶端，滴少量无菌水使其破裂
用无菌吸管加入0.3–0.5 mL液体培养基溶解冻干菌体
接种培养：
将全部菌悬液接种至1–2支血琼脂斜面或液体培养基
37℃恒温培养18–24小时
注意事项：
操作需在无菌环境下进行，建议使用生物安全柜
首次复苏应使用全部冻干物，避免残留
若菌种复苏困难，可进行二次传代培养
核心流程概览：
复苏 → 培养扩增 → 质粒转化 → 诱导表达 → 表达检测（流式细胞术/FACS）
1. 菌种复苏（以冻干粉为例）
操作步骤：
将冻干管离心10秒，使菌粉沉至管底。
用75%酒精擦拭管壁，火焰加热顶端，滴加无菌水使其破裂。
加入0.3 mL YPD液体培养基，轻弹混匀，全部转移至YPD斜面或液体培养基中。
28°C静置培养24–48小时，直至可见乳白色菌落生长。
2. 培养扩增与保种
操作：
挑取单克隆菌落接种至5 mL YPD液体培养基。
28°C、200 rpm摇床培养12–16小时（OD₆₀₀ ≈ 1.0–2.0）。
可取1 mL菌液加入等体积30%甘油，-80°C保存为种子库。
3. 质粒转化（推荐LiAc/PEG法）
转化步骤：
取1 mL对数期酵母菌液，离心弃上清。
加入1 mL 1× TE/LiAc缓冲液重悬。
加入10 μg线性化质粒DNA + 100 μg Carrier DNA。
加入1 mL PEG/LiAc溶液，混匀，30°C水浴30分钟。
加入7% DMSO，42°C热激15分钟，冰浴5分钟。
离心弃上清，用YPD液体培养基重悬，30°C复苏1小时。
涂布于SC-Ura固体培养基，28°C培养48–72小时筛选转化子。
公司正在出售的产品：
中文名称：巴西曲霉
拉丁学名：Aspergillus brasiliensis
安全等级：二级（需在生物安全柜中操作）
提供形式：冻干粉或安瓿瓶
保存条件：
冻干菌种：2–8°C 保存
西林瓶菌种：-20°C 冷冻
复苏后斜面培养物：4°C 短期保藏（不超过1–2个月）
复苏与操作步骤：
安瓿瓶开封：
用75%酒精擦拭瓶身
火焰加热顶端，滴少量无菌水使其破裂
用无菌吸管加入0.3–0.5 mL液体培养基溶解冻干菌体
接种培养：
将全部菌悬液接种至1–2支血琼脂斜面或液体培养基
37℃恒温培养18–24小时
注意事项：
操作需在无菌环境下进行，建议使用生物安全柜
首次复苏应使用全部冻干物，避免残留
若菌种复苏困难，可进行二次传代培养
核心流程概览：
复苏 → 培养扩增 → 质粒转化 → 诱导表达 → 表达检测（流式细胞术/FACS）
1. 菌种复苏（以冻干粉为例）
操作步骤：
将冻干管离心10秒，使菌粉沉至管底。
用75%酒精擦拭管壁，火焰加热顶端，滴加无菌水使其破裂。
加入0.3 mL YPD液体培养基，轻弹混匀，全部转移至YPD斜面或液体培养基中。
28°C静置培养24–48小时，直至可见乳白色菌落生长。
2. 培养扩增与保种
操作：
挑取单克隆菌落接种至5 mL YPD液体培养基。
28°C、200 rpm摇床培养12–16小时（OD₆₀₀ ≈ 1.0–2.0）。
可取1 mL菌液加入等体积30%甘油，-80°C保存为种子库。
3. 质粒转化（推荐LiAc/PEG法）
转化步骤：
取1 mL对数期酵母菌液，离心弃上清。
加入1 mL 1× TE/LiAc缓冲液重悬。
加入10 μg线性化质粒DNA + 100 μg Carrier DNA。
加入1 mL PEG/LiAc溶液，混匀，30°C水浴30分钟。
加入7% DMSO，42°C热激15分钟，冰浴5分钟。
离心弃上清，用YPD液体培养基重悬，30°C复苏1小时。
涂布于SC-Ura固体培养基，28°C培养48–72小时筛选转化子。
公司正在出售的产品：
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