巴斯德毕赤酵母

商品属性：

产品名称	巴斯德毕赤酵母	货号	BKJ4370
英文名称	Pichia pastoris	用途	仅供科研实验

保存条件‌：

冻干粉：4–10°C 冷藏，保质期5–10年
甘油菌：-80°C 保存，避免反复冻融
斜面菌种：4°C 短期保存（1–2个月）
复苏与操作流程：

‌1、冻干粉复苏‌：
离心使菌粉沉底，酒精消毒后火焰加热管顶，滴加无菌水破裂。
加入0.2–0.3 mL复溶液，轻弹混匀，‌全部接种‌至YPD斜面或液体培养基 。
28°C培养24–48小时，观察菌落生长。
2‌、甘油菌使用‌：
蘸取少量甘油菌直接涂板或接种液体培养基，无需完全融化 。
28°C摇床培养12–16小时即可获得对数期菌液。
3‌、质粒转化‌：
推荐使用‌电转化法‌或‌LiAc/PEG法‌导入pYD1系列质粒。
转化后涂布SC-Ura平板，28°C倒置培养48–72小时筛选单克隆 。
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检测原理：

一、检测原理的核心逻辑
检测过程遵循“‌表达 → 展示 → 标记 → 分析‌”的闭环流程：
外源蛋白与酵母锚定蛋白（如Aga2p）融合表达；
融合蛋白被定向锚定在酵母细胞壁表面；
利用特异性抗体识别融合蛋白上的标签（如c-Myc、HA）；
通过荧光标记的二抗与流式细胞仪检测荧光信号，判断蛋白是否成功展示及展示水平。
二、关键检测步骤详解
1. ‌诱导表达与表面展示‌
使用‌GAL1启动子‌控制融合蛋白表达：在含‌半乳糖‌的培养基中诱导，葡萄糖中抑制。
外源蛋白（如scFv抗体、酶）与‌Aga2p锚定蛋白‌融合，在酵母内质网中正确折叠并完成糖基化等修饰。
融合蛋白通过Aga1p-Aga2p二硫键系统稳定展示于细胞表面 。

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