功能学验证 这是验证人胃癌组织成纤维细胞是否“名副其实”的关键步骤,通过检测细胞是否具备其应有的生理功能来确认其身份。
人胃癌组织成纤维细胞特异性功能检测:例如,检测肝细胞的糖原合成能力、胰岛细胞分泌胰岛素的能力或神经元的电生理活动。
细胞行为分析:通过细胞迁移、侵袭等实验来评估其功能特性。
特殊染色:使用特定的染色方法来显示细胞内的特殊物质。例如,用油红O染色来鉴定脂肪人胃癌组织成纤维细胞的脂滴,或用PAS染色来显示糖原。
产品信息:

英文名称 Human Gastric Cancer-Associated Fibroblasts
产品名称 人胃癌组织成纤维细胞
组织来源 胃癌组织
默认种属 人
产品规格 5×10^5Cells/T25
货号:YS-01X7613
细胞简介 :

人胃癌组织源成纤维细胞分离自患有胃癌病人的胃癌组织;胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,在我国各种恶性肿瘤中发病率居首位,胃癌可发生于胃的任何部位,其中半数以上发生于胃窦部,胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累,绝大多数胃癌属于腺癌。在胃癌侵袭和转移的过程中,涉及诸多复杂的过程,如细胞外基质的硬化和降解、新生血管的形成等,而这些过程会直接或间接的引起肿瘤微环境(Tumor mircoenvironment)的改变。肿瘤微环境即肿瘤细胞生存的外部环境,由不同种类的非肿瘤性的细胞与细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)构成,包括纤维细胞,免疫细胞,内皮细胞,间充质干细胞等,肿瘤细胞通过调控这些间质细胞,创造出有利于自身侵袭转移的条件,从而使得肿瘤得到进展。越来越多的证据表明,肿瘤微环境的改变在肿瘤进展中扮演着重要的角色。在肿瘤微环境中,研究最多也是最主要的间质细胞是肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由肿瘤周边的正常成纤维细胞和成纤维细胞样细胞演化而来。胃癌组织源成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。刚分离的胃癌组织源成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介 公司实验室分离的人胃癌组织成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的人胃癌组织成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
人胃癌组织成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞分离步骤:
从实体组织中分离细胞
这个过程的核心目标是将紧密连接的组织解离成单个细胞,形成单细胞悬液。通常包括以下几个步骤:
组织获取与清洗:在无菌条件下获取目标组织,并使用预冷的、不含钙镁离子的平衡盐溶液(如Hanks液或PBS)反复冲洗,以去除血液、坏死组织和杂质。
组织剪碎:使用无菌的解剖刀或剪刀将组织块剪切成约1-3 mm³的小块,以增大后续处理的表面积。
细胞解离:这是最关键的一步,主要有两种方法,也常结合使用。
机械法:通过物理手段分散细胞。例如,用吸管反复吹打、通过不同孔径的细胞筛(如100-200目)过滤、或使用磁力搅拌器进行温和搅拌。
酶消化法:使用特定的酶来分解细胞间的连接蛋白和细胞外基质。常用的酶包括:
胰蛋白酶 (Trypsin):适用于消化细胞间质较少的软组织,如肝、肾、胚胎组织等。通常在37℃下孵育20-30分钟。
胶原酶 (Collagenase):对胶原纤维有很强的消化作用,特别适用于消化富含结缔组织的硬质组织,如肿瘤、乳腺、皮肤等。
Dispase:一种中性蛋白酶,作用相对温和,对细胞损伤较小。
终止消化与过滤:加入含有血清的完全培养基来终止酶的活性(血清中含有酶抑制剂)。随后,用细胞筛(如100μm或更小孔径)过滤细胞悬液,以去除未消化的组织块和大的细胞团。
离心与洗涤:将过滤后的细胞悬液在较低速度下(如500g)离心5-10分钟,弃去上清液。用新鲜的培养基或缓冲液重悬细胞沉淀,重复洗涤1-2次,以彻底去除残留的酶和细胞碎片。
细胞计数与接种:使用血细胞计数板对分离出的细胞进行计数和活性检测(如台盼蓝染色),然后根据实验需求调整细胞密度,接种到培养皿中进行培养。
细胞分离步骤通用注意事项:
无论采用哪种方法,以下几点对于保证细胞活性和实验成功至关重要:
无菌操作:所有步骤都应在超净台中进行,使用的试剂和器材必须无菌,以防细胞污染。
低温环境:在分离过程中,尽量在冰上或4℃环境下操作,以降低细胞代谢,减少损伤。
等渗溶液:使用的所有缓冲液和培养基都必须是等渗的,并含有必要的缓冲体系,以维持细胞正常的渗透压和pH值。
动作轻柔:在吹打、离心和重悬细胞时,动作要轻柔,避免对细胞造成机械损伤。
公司正在出售的产品:
| 人补体蛋白C3标准溶液 |
生物素标记的磷酸化微管相关蛋白单克隆抗体 |
| 细胞三磷酸肌醇(IP3)含量化学荧光定量检测试剂盒 |
碱性磷酸酶(组织非特异性)抗体 |
| 纯化人体RUNX3基因重组表达载体(pcDNA-RUNX3) |
光导蛋白样蛋白PDCL抗体 |
| 细胞短链脂酰脱氢酶(ACYL COA DEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒 |
Ras激酶抑制因子连接增强蛋白1抗体 |
| 细胞一氧化氮合成酶总活性酶动力比色法定量检测试剂盒 |
组蛋白H3样抗体 |
| 组织铜离子浓度荧光定量检测试剂盒 |
微管蛋白β4抗体 |
| 石蜡切片组织线粒体复合物III蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
FITC标记人CD15单克隆抗体 |
| 通用型籽瓜细菌性果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli;Aac) |
尼曼匹克C1前体蛋白抗体 |
| 植物游离吲哚-3-(IAA)比色法定量检测试剂盒(包括萃取) |
多囊肾相关蛋白1抗体 |
| 组织血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)总活性比色法定量检测试剂盒 |
原钙粘蛋白γA5抗体 |
| 动物肝组织细胞分离培养试剂盒 |
ATP依赖RNA解旋酶DDX50抗体 |
| DMDC处理试剂盒 |
磷酸化蛋白激酶C theta抗体 |
| 人口腔上皮细胞 |
人胃癌组织成纤维细胞Human Colonic Fibroblast Cells |
| 人动脉外膜成纤维细胞 |
Primary human lung adenocarcinoma fibroblasts |