细胞简介:
人肾足突细胞分离自肾组织;肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛,被鲍氏囊所包裹,是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管,汇流入静脉,而是流入出球小动脉。在肾小球内,微血管受到高压,而加速了超滤作用(hyperfiltration)的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后,形成滤液,渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体,肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。足细胞(podocyte)即肾小囊脏层上皮细胞,它附着于肾小球基底膜(GBM)的外侧,连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置,使得其体内研究较为困难;又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞,体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状,胞体较大,由胞体伸出许多突起,又称足突(FP),呈指状交叉复盖于GBM外表面,并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连。足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分,IV型胶原和纤维连接蛋白(FN);在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶(MMPs)和组织蛋白酶,从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用。足细胞之间邻近的足突相互交替,形成了许多30-40nm的裂孔,孔上覆盖一层厚4-6nm的裂孔隔膜,即肾小球足突间裂孔隔膜。后者是血浆蛋白通过脉管系统的最后屏障,对于维持肾小球滤过屏障结构与功能完整性发挥关键作用。
方法简介 公司实验室分离的人肾足突细胞采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的人肾足突细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
商品属性:
| 产品名称 |
人肾足突细胞 |
货号 |
YS-01X7272 |
| 英文名称 |
Human Renal Podocyte Cells |
组织来源 |
肾组织 |
| 规格 |
5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
种属 |
人 |
产品信息
产品名称 人肾足突细胞
组织来源 肾组织
默认种属 人
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养信息:
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
人肾足突细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
原代细胞培养过程:
第一阶段:准备与取材
这是整个实验的基础,直接决定了细胞的初始活性和后续培养的成功率。
器材与试剂准备
器材: 确保超净工作台、培养箱、离心机、倒置显微镜等设备运行正常。所有培养瓶、培养皿、移液管、手术器械等必须经过严格的高压灭菌处理。
试剂: 根据细胞类型配制好合适的培养基(如DMEM、RPMI-1640等),并添加胎牛血清(FBS)、抗生素(如青霉素-链霉素)等必需成分。准备好无菌的PBS或Hanks'平衡盐溶液用于洗涤。
组织获取
在无菌条件下,从实验动物或临床手术样本中快速、轻柔地获取目标组织。
取材过程应尽量减少对组织的机械损伤和缺血时间,以保持细胞的高活力。
获取的组织应立即放入预冷(4℃)的、含有高浓度抗生素的PBS或专用运输液中,以抑制污染并维持细胞活性。
第二阶段:分离与纯化
此阶段的目的是从组织中获取高纯度、高活性的单细胞悬液。
组织处理
在超净台内,用含双抗的PBS或Hanks'液反复洗涤组织,彻底去除血液、脂肪和结缔组织等杂质。
用无菌手术剪或刀片将组织剪切成1-3 mm³的小块,以增加酶消化的接触面积。
细胞分离
主要有两种方法,可根据组织类型选择:
酶消化法: 这是最常用的方法。向组织块中加入适量的消化酶(如胰蛋白酶、胶原酶等),在37℃条件下孵育并间歇性振荡或吹打。显微镜下观察,当大部分组织块变得松散、细胞开始游离时,立即加入含血清的培养基终止消化。
组织块贴壁法: 将组织小块直接贴附于培养瓶底,加入少量培养液(不没过组织块),静置数小时让细胞从组织块边缘迁移出来,然后翻转培养瓶,让培养液浸没组织块继续培养。
第三阶段:接种与培养
将分离好的细胞置于模拟体内环境的条件下进行培养。
细胞接种
将调整好浓度的细胞悬液接种到合适的培养容器(如培养瓶、培养板)中。
对于某些难贴壁的细胞,可预先用多聚赖氨酸、胶原等细胞外基质蛋白包被培养表面。
培养条件
将培养容器放入37℃、5% CO₂的恒温恒湿培养箱中静置培养。
接种后24小时内,应在倒置显微镜下观察细胞的贴壁情况、形态和有无污染。
第四阶段:观察与传代
监测细胞状态并在适当时机进行扩增。
日常观察
每天通过倒置显微镜观察细胞的形态、密度和生长状态。健康的原代细胞形态规则,折光性好,立体感强。
细胞传代
当细胞增殖至覆盖培养表面80%-90%(汇合度)时,即可进行传代。
弃去旧培养基,用PBS洗涤后,加入适量胰蛋白酶在37℃下消化,待细胞变圆、间隙增大时,加入含血清的培养基终止消化。
吹打成单细胞悬液,离心后按1:2或1:3的比例分装到新的培养瓶中继续培养。