细胞简介:
大鼠神经干细胞分离自脑皮层组织;大脑分左右两个半球,大脑皮质(灰质)覆盖着每个大脑半球的大部分,它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面,即外侧面(约占整个皮质面积的1/3)、内侧面和底面(占2/3的面积);半球表面有很多深浅不等的沟或裂,沟或裂之间的隆起叫回,它们大大增加了大脑的表面积;大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔,使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。神经干细胞具有分化为神经神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力,能自我更新,并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞,它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是,在脑脊髓等所有神经组织中,不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同,分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种,它具有其它所有干细胞的基本特征:具有自我维持和自我更新能力,具有多种分化潜能,具有分化为本系统大部分类型细胞的能力,这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生,对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移,并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力,已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点,体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后,可形成神经球,神经球在培养基中呈悬浮生长,予以更换半量培基,1周后用吸管轻柔吹打球形克隆成为小的神经球和单细胞悬液,将部分细胞接种到新的培养瓶中,2×105个细胞/瓶,每7-10d传代1次,每隔3d离心更换半量培养基1次,培养条件不变。
方法简介 公司实验室分离的大鼠神经干细胞采用胰蛋白酶消化后差速贴壁,结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来,总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠神经干细胞经Nestin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
商品属性:
| 产品名称 |
大鼠神经干细胞 |
货号 |
YS-01X7437 |
| 英文名称 |
Rat Neural Stem Cells |
组织来源 |
脑组织 |
| 规格 |
5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
种属 |
大鼠 |
产品信息
产品名称 大鼠神经干细胞
组织来源 脑组织
默认种属 大鼠
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养信息:
培养基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 悬浮
细胞形态 球形
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶,Accutase
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠神经干细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
原代细胞培养过程:
第一阶段:准备与取材
这是整个实验的基础,直接决定了细胞的初始活性和后续培养的成功率。
器材与试剂准备
器材: 确保超净工作台、培养箱、离心机、倒置显微镜等设备运行正常。所有培养瓶、培养皿、移液管、手术器械等必须经过严格的高压灭菌处理。
试剂: 根据细胞类型配制好合适的培养基(如DMEM、RPMI-1640等),并添加胎牛血清(FBS)、抗生素(如青霉素-链霉素)等必需成分。准备好无菌的PBS或Hanks'平衡盐溶液用于洗涤。
组织获取
在无菌条件下,从实验动物或临床手术样本中快速、轻柔地获取目标组织。
取材过程应尽量减少对组织的机械损伤和缺血时间,以保持细胞的高活力。
获取的组织应立即放入预冷(4℃)的、含有高浓度抗生素的PBS或专用运输液中,以抑制污染并维持细胞活性。
第二阶段:分离与纯化
此阶段的目的是从组织中获取高纯度、高活性的单细胞悬液。
组织处理
在超净台内,用含双抗的PBS或Hanks'液反复洗涤组织,彻底去除血液、脂肪和结缔组织等杂质。
用无菌手术剪或刀片将组织剪切成1-3 mm³的小块,以增加酶消化的接触面积。
细胞分离
主要有两种方法,可根据组织类型选择:
酶消化法: 这是最常用的方法。向组织块中加入适量的消化酶(如胰蛋白酶、胶原酶等),在37℃条件下孵育并间歇性振荡或吹打。显微镜下观察,当大部分组织块变得松散、细胞开始游离时,立即加入含血清的培养基终止消化。
组织块贴壁法: 将组织小块直接贴附于培养瓶底,加入少量培养液(不没过组织块),静置数小时让细胞从组织块边缘迁移出来,然后翻转培养瓶,让培养液浸没组织块继续培养。
第三阶段:接种与培养
将分离好的细胞置于模拟体内环境的条件下进行培养。
细胞接种
将调整好浓度的细胞悬液接种到合适的培养容器(如培养瓶、培养板)中。
对于某些难贴壁的细胞,可预先用多聚赖氨酸、胶原等细胞外基质蛋白包被培养表面。
培养条件
将培养容器放入37℃、5% CO₂的恒温恒湿培养箱中静置培养。
接种后24小时内,应在倒置显微镜下观察细胞的贴壁情况、形态和有无污染。
第四阶段:观察与传代
监测细胞状态并在适当时机进行扩增。
日常观察
每天通过倒置显微镜观察细胞的形态、密度和生长状态。健康的原代细胞形态规则,折光性好,立体感强。
细胞传代
当细胞增殖至覆盖培养表面80%-90%(汇合度)时,即可进行传代。
弃去旧培养基,用PBS洗涤后,加入适量胰蛋白酶在37℃下消化,待细胞变圆、间隙增大时,加入含血清的培养基终止消化。
吹打成单细胞悬液,离心后按1:2或1:3的比例分装到新的培养瓶中继续培养。