细胞简介:
大鼠淋巴结淋巴细胞分离自淋巴结;淋巴结是哺乳类特有的周围淋巴器官,由淋巴细胞集合而成。呈豆形,位于淋巴管行进途中,是产生免疫应答的重要器官之一。淋巴结表面包有被膜,被膜的结缔组织伸入淋巴结内形成小梁,构成淋巴结的支架。被膜下为皮质区,淋巴结的中心及门部为髓质区。皮质区有淋巴小结、弥散淋巴组织和皮质淋巴窦(简称皮窦),髓质包括由致密淋巴组织构成的髓索和髓质淋巴窦(简称髓窦)。淋巴窦的窦腔内有许多淋巴细胞和巨噬细胞,从输入淋巴管流来的淋巴液先进入皮窦再流向髓窦,最后经输出淋巴管离开淋巴结。淋巴结的主要功能是滤过淋巴液,产生淋巴细胞和浆细胞,参与机体的免疫反应。淋巴结肿大或疼痛常表示其属区范围内的器官有炎症或其他病变。主要功能是滤过淋巴液,产生淋巴细胞和浆细胞,参与机体的免疫反应;当局部感染时,细菌、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入,引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们,则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴结淋巴细胞是白细胞的一种,由次级淋巴器官淋巴结产生,是机体免疫应答功能的重要细胞成分;细胞为圆形细胞核,细胞质少。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖,继而发挥其免疫功能。
方法简介 公司实验室分离的大鼠淋巴结淋巴细胞采用分离淋巴结组织、研磨获取单细胞悬液后通过密度梯度离心法制备而来,细胞总量约为1×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的大鼠淋巴结淋巴细胞经过检测,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
商品属性:
| 产品名称 |
大鼠淋巴结淋巴细胞 |
货号 |
YS-01X7526 |
| 英文名称 |
Rat Lymph Node Lymphocyte Cells |
组织来源 |
淋巴结 |
| 规格 |
5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
种属 |
大鼠 |
产品信息
产品名称 大鼠淋巴结淋巴细胞
组织来源 淋巴结
默认种属 大鼠
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 悬浮
细胞形态 圆形
传代特性 不增殖;不传代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠淋巴结淋巴细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
原代细胞培养过程:
第一阶段:准备与取材
这是整个实验的基础,直接决定了细胞的初始活性和后续培养的成功率。
器材与试剂准备
器材: 确保超净工作台、培养箱、离心机、倒置显微镜等设备运行正常。所有培养瓶、培养皿、移液管、手术器械等必须经过严格的高压灭菌处理。
试剂: 根据细胞类型配制好合适的培养基(如DMEM、RPMI-1640等),并添加胎牛血清(FBS)、抗生素(如青霉素-链霉素)等必需成分。准备好无菌的PBS或Hanks'平衡盐溶液用于洗涤。
组织获取
在无菌条件下,从实验动物或临床手术样本中快速、轻柔地获取目标组织。
取材过程应尽量减少对组织的机械损伤和缺血时间,以保持细胞的高活力。
获取的组织应立即放入预冷(4℃)的、含有高浓度抗生素的PBS或专用运输液中,以抑制污染并维持细胞活性。
第二阶段:分离与纯化
此阶段的目的是从组织中获取高纯度、高活性的单细胞悬液。
组织处理
在超净台内,用含双抗的PBS或Hanks'液反复洗涤组织,彻底去除血液、脂肪和结缔组织等杂质。
用无菌手术剪或刀片将组织剪切成1-3 mm³的小块,以增加酶消化的接触面积。
细胞分离
主要有两种方法,可根据组织类型选择:
酶消化法: 这是最常用的方法。向组织块中加入适量的消化酶(如胰蛋白酶、胶原酶等),在37℃条件下孵育并间歇性振荡或吹打。显微镜下观察,当大部分组织块变得松散、细胞开始游离时,立即加入含血清的培养基终止消化。
组织块贴壁法: 将组织小块直接贴附于培养瓶底,加入少量培养液(不没过组织块),静置数小时让细胞从组织块边缘迁移出来,然后翻转培养瓶,让培养液浸没组织块继续培养。
第三阶段:接种与培养
将分离好的细胞置于模拟体内环境的条件下进行培养。
细胞接种
将调整好浓度的细胞悬液接种到合适的培养容器(如培养瓶、培养板)中。
对于某些难贴壁的细胞,可预先用多聚赖氨酸、胶原等细胞外基质蛋白包被培养表面。
培养条件
将培养容器放入37℃、5% CO₂的恒温恒湿培养箱中静置培养。
接种后24小时内,应在倒置显微镜下观察细胞的贴壁情况、形态和有无污染。
第四阶段:观察与传代
监测细胞状态并在适当时机进行扩增。
日常观察
每天通过倒置显微镜观察细胞的形态、密度和生长状态。健康的原代细胞形态规则,折光性好,立体感强。
细胞传代
当细胞增殖至覆盖培养表面80%-90%(汇合度)时,即可进行传代。
弃去旧培养基,用PBS洗涤后,加入适量胰蛋白酶在37℃下消化,待细胞变圆、间隙增大时,加入含血清的培养基终止消化。
吹打成单细胞悬液,离心后按1:2或1:3的比例分装到新的培养瓶中继续培养。