产品概述
原癌基因FRAT1抗体是针对原癌基因FRAT1(FRAT1)制备的特异性抗体。FRAT1是Wnt信号通路的正调控因子,通过与GSK3β结合,抑制其活性,从而激活Wnt信号通路,促进细胞增殖和肿瘤发生,其表达异常与多种肿瘤(如乳腺癌、卵巢癌)的发生发展相关。该抗体可用于WB、IHC等实验,帮助研究人员检测FRAT1的表达水平,为探讨Wnt信号通路调控机制及肿瘤发病机制提供研究工具,在肿瘤生物学、细胞信号传导研究等领域具有应用价值。
产品基本信息
中文名称:原癌基因FRAT1抗体
英文名称:FRAT1 Rabbit pAb
英文别名:FRAT 1; frequently rearranged in advanced T cell lymphomas; Frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas; GSK 3 binding protein FRAT1; proto oncogene FRAT1; FRAT1_HUMAN.
产品应用:WB=1:500-2000, ELISA=1:5000-10000
抗体来源:Rabbit
免疫源:KLH conjugated synthetic peptide derived from human FRAT1
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量:29 kDa
浓度:1mg/ml
储存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
抗体制备核心步骤
多克隆抗体制备(核心4步)
抗原制备:重组蛋白/合成肽段偶联载体蛋白,纯度≥90%
动物免疫:首免用弗氏完全佐剂,间隔2-4周加强免疫,ELISA监测效价
血清纯化:效价达标后采血,Protein A/G亲和层析纯化IgG
鉴定保存:WB/ELISA验证特异性,-20℃分装保存
单克隆抗体制备(核心5步)
免疫脾细胞:小鼠免疫后取脾,制备单细胞悬液
细胞融合:脾细胞+骨髓瘤细胞经PEG融合,HAT培养基筛选杂交瘤
克隆筛选:ELISA检测阳性孔,有限稀释法获得单克隆株
抗体制备:腹水诱生/体外大规模培养,Protein A/G纯化
鉴定保存:亚型/亲和力鉴定,-20℃分装保存
通用关键要点
抗原优先选亲水性表位,避免跨膜区/重复序列
多抗常用兔/羊,单抗用BALB/c小鼠,种属匹配防排斥
纯化后抗体加50%甘油,避免反复冻融
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抗体的鉴定
1)抗体的效价鉴定:鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2)抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。
3)抗体的亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。