产品概述
胰岛素样肽5抗体是针对胰岛素样肽5(INSL5)制备的特异性抗体,INSL5是一种结构与胰岛素相似的肽类激素,主要在肠道中表达,参与肠道运动、能量代谢等生理过程的调控,其表达异常与肠道疾病、代谢性疾病等相关。该抗体可用于ELISA、免疫组化等实验,帮助研究人员检测INSL5的表达水平和定位,为探讨其生物学功能及相关疾病发病机制提供研究工具,在肠道疾病研究、代谢性疾病研究等领域具有应用价值。
产品基本信息
中文名称:胰岛素样肽5抗体
英文名称:DILP5 Rabbit pAb
英文别名:CG33273; CG33273-PA; Dilp 5; dilp; dilp-5; Dmel\CG33273; drosophila insulin-like peptide 5; gene product from transcript CG33273-RA; HDC09365; Ilp; Ilp-5; Ilp5; INSL5_DROME; Insulin-like peptide 5; insulin-like peptide; insulin-like peptide-5; Insulin-related peptide 5; Probable insulin-like peptide 5 B chain
产品应用:IHC-P=1:100-500, IHC-F=1:100-500, IF=1:100-500, ICC/IF=1:100-500, ELISA=1:5000-10000
交叉反应:Fruit Fly
抗体来源:Rabbit
免疫源:KLH conjugated synthetic peptide derived from Fire fly DILP5
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量:9.5 kDa
浓度:1mg/ml
储存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
实验操作过程建议
Western Blot
凝胶制备:分离胶浓度根据靶蛋白分子量选择(如20kDa用15%胶,100kDa用8%胶);
转膜:用湿转或半干转,转膜电流/电压根据蛋白分子量调整,小分子蛋白缩短转膜时间,大分子蛋白延长时间;
封闭:用5%脱脂牛奶或BSA封闭1-2小时,避免非特异性结合(磷酸化蛋白检测需用BSA封闭);
抗体孵育:一抗4℃孵育过夜,二抗室温孵育1小时,减少背景信号。
IHC/IF
组织切片:厚度控制在4-6μm,避免过厚导致染色不均;
抗原修复:IHC常用柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)高压修复,IF常用Triton X-100透化,根据抗体说明书选择合适方法;
抗体孵育:IHC用3%H₂O₂灭活内源性过氧化物酶,IF用5%BSA封闭非特异性结合,孵育抗体时注意避光(IF);
染色后处理:IHC用苏木素复染细胞核,IF用DAPI染核,封片时避免产生气泡。
ELISA
包被:用碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释抗原/抗体,4℃包被过夜,确保抗原/抗体均匀吸附在板上;
孵育:严格控制孵育时间和温度,避免出现边缘效应;
洗板:每步洗板3-5次,拍干孔内液体,避免残留未结合的抗体或抗原;
显色:加入底物后避光显色,显色时间根据说明书调整,避免显色过度。
IP
细胞裂解:用温和的非离子型去污剂(如NP-40)裂解细胞,保持蛋白复合物的稳定性;
抗体-磁珠孵育:提前将一抗与Protein A/G磁珠孵育1-2小时,形成抗体-磁珠复合物,减少非特异性结合;
洗涤:用含低浓度去污剂的洗涤液洗涤3-5次,去除非特异性结合的蛋白;
洗脱:用中性pH的洗脱液或煮沸法洗脱,避免蛋白变性。
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实验操作结果判断
WB:条带单一清晰为有效结果,若出现杂带,可能是抗体非特异性结合或蛋白降解;
IHC/IF:阳性信号定位准确为有效结果,若背景过高,可能是封闭不充分或抗体浓度过高;
ELISA:孔间吸光度值变异系数(CV)<10%为有效结果,若CV过大,可能是包被不均或洗板不彻底;
IP:能检测到靶蛋白及相互作用蛋白为有效结果,若未检测到,可能是蛋白相互作用弱或裂解条件不当。
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