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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
双抗体夹心法的核心步骤如下：
固相抗体包被：试剂盒的酶标板孔内预先包被了能特异性捕获TOXB的抗体（固相抗体）。
抗原抗体结合：向孔中加入样本（如粪便、细胞培养上清等）或标准品，样本中的TOXB（抗原）会与固相抗体结合。
形成“夹心”复合物：洗去未结合的物质后，加入另一种能与TOXB不同位点结合的抗体（检测抗体）。该检测抗体通常被辣根过氧化物酶（HRP）标记。这样，TOXB就被“夹”在固相抗体和酶标检测抗体之间。
显色与测定：再次洗涤后，加入显色底物（如TMB）。HRP会催化底物发生颜色反应（通常由无色变为蓝色），加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中TOXB的浓度成正比。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
通过测定一系列已知浓度标准品的OD值绘制标准曲线，即可根据样本的OD值计算出其中TOXB的浓度。
产品属性
主要产品性能参数
检测范围 试剂盒能够准确定量的浓度区间。 12.5 pg/mL – 400 pg/mL 或 31.25 ng/mL 起
灵敏度 能够检测到的最低TOXB浓度。 小于 1.0 pg/mL
样本类型 适用于检测的生物样本种类。 粪便、血清、血浆、细胞培养上清液等
特异性 只与目标分子（TOXB）反应，不与其他物质交叉反应。 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应。
重复性 衡量检测结果的一致性，通常用变异系数（CV）表示。 板内变异系数（CV）小于10%，板间变异系数小于15%。
固相抗体包被：试剂盒的酶标板孔内预先包被了能特异性捕获TOXB的抗体（固相抗体）。
抗原抗体结合：向孔中加入样本（如粪便、细胞培养上清等）或标准品，样本中的TOXB（抗原）会与固相抗体结合。
形成“夹心”复合物：洗去未结合的物质后，加入另一种能与TOXB不同位点结合的抗体（检测抗体）。该检测抗体通常被辣根过氧化物酶（HRP）标记。这样，TOXB就被“夹”在固相抗体和酶标检测抗体之间。
显色与测定：再次洗涤后，加入显色底物（如TMB）。HRP会催化底物发生颜色反应（通常由无色变为蓝色），加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中TOXB的浓度成正比。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
通过测定一系列已知浓度标准品的OD值绘制标准曲线，即可根据样本的OD值计算出其中TOXB的浓度。
产品属性
| 产品名称 | 人难辨梭状芽孢杆菌毒素B(TOXB)试剂盒 | 货号 | LZ-E029520 |
| 英文名称 | Human clostridium difficile Toxin B,TOXB ELISA kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
灵敏度 能够检测到的最低TOXB浓度。 小于 1.0 pg/mL
样本类型 适用于检测的生物样本种类。 粪便、血清、血浆、细胞培养上清液等
特异性 只与目标分子（TOXB）反应，不与其他物质交叉反应。 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应。
重复性 衡量检测结果的一致性，通常用变异系数（CV）表示。 板内变异系数（CV）小于10%，板间变异系数小于15%。
ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物，不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度
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