人凝血酶原前体蛋白(PIVKA-II)试剂盒

检测原理：
包被与捕获：试剂盒的微孔板上预先包被了能特异性结合人PIVKA-II的捕获抗体（通常为PIVKA-II单克隆抗体，如C4B6）。
抗原抗体反应：向微孔中依次加入待测样本（如血清、血浆）和酶标记的检测抗体（通常为HRP标记的抗人凝血酶原抗体）。样本中的PIVKA-II（抗原）会同时与包被的捕获抗体和检测抗体结合，形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物，并固定在微孔板上。
洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的游离物质。
显色反应：加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。在辣根过氧化物酶（HRP）的催化下，TMB由无色变为蓝色。
终止与检测：加入终止液（通常为硫酸）后，反应终止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中PIVKA-II的浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算出样本中PIVKA-II的浓度。
产品名称：人凝血酶原前体蛋白(PIVKA-II)试剂盒
英文名称：Human PIVKA-II ELISA Kit
规格：48T/96T
货号：LZ-E029461
用途：仅供科研研究实验
核心参数概览：
灵敏度  < 1.0 mAU/mL 或 < 0.1 ng/mL  具体数值依厂家而定，高灵敏度试剂盒可达此标准
检测范围  2 - 1000 mAU/mL 或 0.5 - 20 ng/mL  也有部分试剂盒范围可能不同，需参照说明书
特异性  高  识别人源PIVKA-II，与正常凝血酶原及其他蛋白无明显交叉反应
重复性  CV < 10% (批内), CV < 15% (批间)  板内和板间变异系数通常小于15%
样本处理要求：
1‌、血清‌：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清；可暂存于-20℃或-80℃，避免反复冻融
2‌、血浆‌：推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集，采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟，取上清检测
3‌、组织匀浆‌：用预冷PBS冲洗组织去除残留血液，按1:9（重量:体积）比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨，超声或反复冻融辅助裂解后，5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要：
‌一、试剂平衡‌：将试剂盒各组分于室温放置20分钟，恢复至常温。
‌二、加样‌：设空白孔、标准品孔（梯度浓度）、待测样本孔，每孔加入50μL样本或标准品。
‌三、孵育结合‌：每孔再加入HRP标记抗体100μL，37℃避光温育60分钟。
‌四、洗涤‌：弃液后用洗涤液洗板5次，拍干。
‌五、显色‌：每孔加TMB显色液A、B各50μL，37℃避光反应15分钟。
六、终止‌：每孔加50μL终止液，颜色由蓝转黄。
七、读数‌：15分钟内于450nm测定OD值，绘制标准曲线并计算浓度。
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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