包被与竞争:试剂盒的微孔板预先包被了能特异性识别人皮质醇(Cortisol)的捕获抗体。向微孔中同时加入待测样本(如血清、血浆、唾液等)和酶标记的皮质醇抗原(或生物素标记的皮质醇)。
竞争结合:样本中的游离皮质醇与酶标记的皮质醇会竞争结合固相上有限数量的抗体位点。
洗涤与分离:温育后,进行洗涤。样本中皮质醇浓度越高,与抗体结合的酶标记皮质醇就越少;反之,样本中皮质醇浓度越低,结合的酶标记皮质醇就越多。
显色与检测:加入TMB底物溶液,酶催化TMB显色(蓝色),加入终止液后变为黄色。此时,颜色的深浅与样本中皮质醇的浓度呈负相关(即反比关系)。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中皮质醇的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E029438 |
| 英文名称 |
Human Cortisol ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
检测方法:竞争法 ELISA
检测范围:不同试剂盒的检测范围差异较大,例如 0.5 - 200 ng/mL 或 3.125 - 200 ng/mL。
灵敏度:通常在 < 1 ng/mL 级别,例如 0.1 ng/mL 或 0.46 ng/mL。
精密度:
批内变异系数(CV):通常小于 10%
批间变异系数(CV):通常小于 15%。
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
公司正在出售的产品
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环指蛋白150抗体 |
| ORC4L蛋白抗体 |
附睾特异蛋白9抗体 |
| 植烷酰辅酶A羟化酶2相互作用蛋白抗体 |
嗅觉受体5D3抗体 |
| 2号染色体开放阅读框18抗体 |
卷曲螺旋结构域蛋白90B抗体 |
| SND1蛋白抗体 |
G氨基丁酸受体γ1/GABAA Rγ1抗体 |
| 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SGK2抗体 |
DMRTA2蛋白抗体 |
| 小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒 |
人皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒 |
| 人皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒 |
人程序性死亡-1(PD-1)ELISA试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。