人CORT ELISA试剂盒通常采用竞争性酶联免疫吸附试验。
核心逻辑:样本中的皮质酮(抗原)与酶标记的皮质酮(酶标抗原)竞争结合固相上有限量的特异性抗体。
包被:酶标板上预包被了抗皮质酮的特异性抗体。
竞争结合:
往微孔中加入待测样本(含未知浓度的皮质酮)和酶标记的皮质酮(HRP-Conjugated Corticosterone)。
样本中的皮质酮与酶标皮质酮竞争结合固相上的抗体位点。
关键点:样本中皮质酮浓度越高,占据的抗体位点越多,结合在板上的酶标皮质酮就越少。
洗板:洗去未结合的游离成分(包括未结合的酶标抗原)。
显色:加入底物溶液(如TMB)。TMB在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化成蓝色。
终止与测定:加入终止液,颜色由蓝变黄。
结果判定:颜色的深浅与样本中皮质酮的浓度呈负相关(即样本浓度越高,OD值越低)。
(注:市面上也有部分采用双抗体夹心法的试剂盒,若是夹心法,则颜色深浅与浓度呈正相关,请务必以具体购买的试剂盒说明书为准。)
产品属性
| 产品名称 |
人皮质酮(CORT)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E029435 |
| 英文名称 |
Human Corticoserone,CORT ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
参数项目 指标详情
检测类型 竞争法 ELISA (Competitive ELISA)
检测范围 1.56 - 100 ng/mL (或 3.125 - 100 ng/mL,具体视品牌而定)
灵敏度 < 0.5 ng/mL (高灵敏度可达 pg/mL 级别,如 1.2 pg/mL)
特异性 针对人皮质酮,与氢化可的松、睾酮等无明显交叉反应 (<1%)
重复性 板内变异系数 (CV) < 10%;板间变异系数 (CV) < 15%
适用样本 血清、血浆、尿液、唾液、组织匀浆、细胞培养上清
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度