人皮质抑素(CORT)ELISA试剂盒
检测原理:
竞争法 (Competitive ELISA)
这是检测小分子激素(如CORT)最常用的方法。
包被与竞争:微孔板上预先包被了抗CORT的特异性抗体。在反应体系中,样本中的CORT(待测抗原)与生物素标记的CORT(标记抗原)共同竞争结合板上有限数量的抗体位点。
酶结合与洗涤:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,它会与生物素标记的CORT结合。通过洗涤步骤,去除未结合的物质。
显色与结果判定:加入底物TMB显色。样本中CORT的浓度越高,占据的抗体位点就越多,导致生物素标记的CORT结合量减少,最终显色越浅。因此,颜色的深浅与样本中CORT的浓度呈负相关。
产品名称:
人皮质抑素(CORT)ELISA试剂盒
英文名称:Human CORT ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029433
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
参数 竞争法典型范围 夹心法典型范围 备注
灵敏度 ≤ 0.5 ng/mL 1.688 ng/mL 竞争法通常灵敏度更高
检测范围 1.56 - 100 ng/mL 2.81 - 180 ng/mL 具体范围需参照说明书
特异性 高 高 与氢化可的松、睾酮等无明显交叉反应(<1%)
重复性 CV < 10% (批内), CV < 15% (批间) - 板内和板间变异系数
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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