人平滑肌肌动蛋白(SMA)ELISA试剂盒
检测原理:
包被与捕获:试剂盒的微孔板预先包被了能特异性识别人平滑肌肌动蛋白(SMA)的捕获抗体。
抗原结合:向微孔中加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等),样本中的SMA抗原会与固相上的捕获抗体结合。
形成夹心复合物:洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人SMA检测抗体,它会与已被捕获的SMA结合,形成“固相捕获抗体-SMA抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。部分试剂盒会采用生物素-亲和素系统进行信号放大。
显色与检测:再次洗涤并加入TMB底物溶液,HRP催化TMB显色(蓝色),加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中SMA的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中SMA的浓度。
产品名称:
人平滑肌肌动蛋白(SMA)ELISA试剂盒
英文名称:Human Smooth muscle actin,SMA ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029430
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测方法:双抗体夹心法
检测范围:不同试剂盒的检测范围差异较大,例如 31.2 - 2000 pg/mL 或 0.156 - 10 ng/mL。
灵敏度:通常在 < 20 pg/mL 级别,例如 18.75 pg/mL。
精密度:
批内变异系数(CV):通常小于 10%
批间变异系数(CV):通常小于 12%。
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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