人去乙酰化酶Sirtuin-1ELISA试剂盒
检测原理:
人SIRT1 ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。其核心逻辑是利用两种特异性抗体“夹住”样本中的SIRT1抗原,通过显色反应定量,颜色深浅与浓度成正比。
包被:酶标板上预包被了针对人SIRT1的特异性捕获抗体(通常是抗SIRT1单抗)。
加样与结合:
往包被的微孔中加入待测样本(血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆等)和酶标检测抗体(通常是HRP标记的抗SIRT1抗体)。
样本中的SIRT1蛋白会同时与固相上的捕获抗体和液相中的酶标抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”的复合物。
洗板:洗去未结合的游离成分。
显色:加入底物溶液(如TMB)。TMB在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色。
终止与测定:加入终止液(酸性溶液),颜色由蓝变黄。颜色的深浅与样本中SIRT1的浓度呈正相关。
产品名称:
人去乙酰化酶Sirtuin-1ELISA试剂盒
英文名称:Human NAD-dependent deacetylase sirtuin-1,SIRT1/SIR2L1 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029354
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测类型 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 0.156 - 10 ng/mL (常见范围,部分试剂盒可达 15.6-1000 pg/mL)
灵敏度 < 0.039 ng/mL (最低检测浓度,通常极低)
特异性 针对人SIRT1,与人SIRT2、SIRT6等其他家族成员无明显交叉反应
重复性 板内变异系数 (CV) < 8%;板间变异系数 (CV) < 10%
适用样本 血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆、细胞培养上清
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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